色谱 , 2017, 35(3): 332-338.
10.3724/SP.J.1123.2016.10025
动力学毛细管电泳法求解蛋白质与单链脱氧核糖核苷酸结合的解离常数及可靠性分析
魏强
1,
,
杨歌
2,
,
管桦
3,
,
屈锋
4,
1.北京理工大学生命学院,北京,100081;
2.北京理工大学生命学院,北京,100081;
3.公安部第一研究所,北京,102200;
4.北京理工大学生命学院,北京,100081
平衡混合物的非平衡毛细管电泳(NECEEM)可用于测定复合物的解离常数(Kd).该文以单链脱氧核糖核苷酸结合蛋白(SSB)和单链脱氧核糖核苷酸(ssDNA)相互作用为模型,分析了相互作用强弱的电泳图谱特征,测定了不同条件下复合物的Kd,建立了基于积分偏差的误差分析方法.结果表明,SSB与ssDNA相互作用强弱所致的电泳图差异、SSB与ssDNA的浓度比、毛细管分离温度均影响Kd的计算.此外,基于25 ℃时SSB与5′-GGTTGGTGTGGTTGG-3′(15mer)人凝血酶适配体作用模型的数值分析结果表明,在现有实验条件下,手动积分峰面积时产生的面积偏差对Kd计算结果有影响,但在10%的偏差区间内,所求Kd值的最大相对偏差小于7%,所求Kd值的误差可忽略.该文证实了基于NECEEM求解动力学相关参数的方法可靠.
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