高速逆流色谱双水相体系分离蛋白质

色谱 , 2005, 23(1): 12-17. doi: 10.3321/j.issn:1000-8713.2005.01.003

高速逆流色谱双水相体系分离蛋白质

郅文波 ^1, , 邓秋云 ^2, , 宋江楠 ^3, , 顾铭 ^4, , 欧阳藩 ^5,

1.中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室,北京,100080

2.上海同田生化技术有限公司,上海,200122

3.中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室,北京,100080

4.中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室,北京,100080

5.中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室,北京,100080

关键词：高速逆流色谱 , 双水相体系 , 蛋白质 , 分离纯化

Separation of Proteins in Aqueous Two-Phase Systems with High-Speed Counter-Current Chromatography

利用多分离柱高速逆流色谱仪,研究了聚乙二醇1000(PEG1000)-磷酸盐双水相体系的固定相保留率及该体系对蛋白质混合物和鸡蛋清样品的分离.以14.0%PEG1000-16.0%磷酸盐体系的上相为固定相,在流速0.6mL/min和转速900 r/min的条件下,固定相的保留率达到33.3%.在pH 9.2的PEG1000-磷酸盐双水相体系中,细胞色素C、溶菌酶和血红蛋白的分配系数差异最大,采用该pH值的14.0%PEG1000-16.0%磷酸钾盐双水相体系,在流速1.0 mL/min和转速850 r/min的条件下,成功地分离了这3种蛋白质的混合物.鸡蛋清中的主要蛋白质成分--卵转铁蛋白、卵白蛋白和溶菌酶在pH 9.2的15.0%PEG1000-17.0%磷酸钾盐体系中也具有最大的分配系数差异.采用该体系,在流速1.0 mL/min和转速850 r/min的条件下,成功地分离了鸡蛋清样品,得到的卵白蛋白、溶菌酶和卵转铁蛋白的电泳纯度分别为100%,100%和60%,收率均大于90%.

参考文献

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