为了获得剔除柚皮苷(naringin)的中药方剂四逆散样品以供其药理活性探讨时使用,制备了抗柚皮苷抗体的免疫亲和色谱柱,用于特异性地剔除四逆散中的柚皮苷.首先合成了柚皮苷的完全抗原柚皮苷与牛血清白蛋白的结合物naringin-BSA,并用naringin-BSA对新西兰兔进行免疫获得抗血清,再将其纯化后与经CNBr活化的Sepharose 4B凝胶共价偶联制成免疫亲和色谱柱.将四逆散提取物样品溶液上样该色谱柱,洗脱,制得特异性剔除了柚皮苷的四逆散样品.由检测结果可知,naringin-BSA被成功合成.将其用于免疫新西兰兔,获得的抗血清的效价经酶联免疫吸附法(ELISA)测定达到1∶30000,抗体IgG的纯度达94% ,交叉反应率低.在IgG与Sepharose 4B合成的IgG-Sepharose免疫亲和色谱柱中,IgG的偶联率为87% .用该免疫亲和色谱柱处理四逆散后,其中所含的柚皮苷几乎完全被剔除.结果证明,利用抗柚皮苷免疫亲和色谱,能特异性地剔除四逆散或其他样品中的柚皮苷成分.
参考文献
| [1] | Sun Y,Chen T,Xu Q.J Pharm Pharmacol,2003,55:839 |
| [2] | Zhang L,Sun Y,Chen T,Xu Q.Int Immunopharmacol,2005,5(7/8):1 193 |
| [3] | Goodfriend T L,Levine L,Fasman G D.Science,1964,144:1 344 |
| [4] | Akbarzadeh A,Mehraby M,Zarbakhsh M,Farzaneh H.Biotechnol Appl Biochem,1999,30(2):139 |
| [5] | Lu Z H,Morinaga O,Tanaka H,Shoyama Y.Biol Pharm Bull,2003,26(6):862 |
| [6] | Gilbert S,Halliwell R E W.Veterinary Immunol Immunopathol,1998,63:223 |
| [7] | Putalun W,Tanaka H,Shoyama Y.Phytochem Anal,2005,16(5):370 |
| [8] | Weiler E W,Zenk M H.Phytochem,1976,15:1 537 |
| [9] | Zhao M P,Liu Y,Li Y Z,Zhang X X,Chang W B.J Chromatogr B,2003,783(2):401 |
| [10] | Muronetz V I,Korpela T.J Chromatogr B,2003,790:53 |
| [11] | Wu Xiongwen,Liang Zhihui.Applied Laboratorial Technology of Immunology.Wuhan:Hubei Science and Technology Press (吴雄文,梁智辉.实用免疫学实验技术.武汉:湖北科学技术出版社),2002:36 |
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