敬钊毒素-V剪切体Y1-JZTX-V的化学合成与氧化复性及其钠通道活性鉴定

色谱 , 2007, 25(4): 501-504. doi: 10.3321/j.issn:1000-8713.2007.04.011

敬钊毒素-V剪切体Y1-JZTX-V的化学合成与氧化复性及其钠通道活性鉴定

全妙华 ^1, , 曾雄智 ^2, , 皮建辉 ^3, , 邓梅春 ^4, , 梁宋平 ^5,

1.湖南师范大学,蛋白质化学与发育生物学教育部重点实验室,湖南,长沙,410081;怀化学院生物工程系,湖南,怀化,418008

2.湖南师范大学,蛋白质化学与发育生物学教育部重点实验室,湖南,长沙,410081

3.湖南师范大学,蛋白质化学与发育生物学教育部重点实验室,湖南,长沙,410081;怀化学院生物工程系,湖南,怀化,418008

4.湖南师范大学,蛋白质化学与发育生物学教育部重点实验室,湖南,长沙,410081

5.湖南师范大学,蛋白质化学与发育生物学教育部重点实验室,湖南,长沙,410081

基金项目: 国家自然科学基金(30430170)

关键词：化学合成 , 敬钊毒素-V剪切体 , 复性 , 钠离子通道

Synthesis and Oxidative Refolding of an N-Terminal Truncate of Jingzhaotoxin-V and Characterization of Its Activities of Sodium Channels

应用芴甲氧羰基(Fmoc)固相方法化学合成了敬钊毒素-V(JZTX-V)分子N-端酪氨酸残基剪切体(Y1-JZTX-V),并且通过反相高效液相色谱和质谱对不同条件下的氧化复性结果进行监测,从而得到该剪切体的最佳氧化复性条件:0.1 mol/L Tris-HCl缓冲液、pH 7.50、1 mmol/L还原型谷胱甘肽(GSH)、0.1 mmol/L氧化型谷胱甘肽(GSSG)、样品浓度为0.05 mg/L、复性温度为4 ℃.膜片钳电生理实验结果显示敬钊毒素-V剪切体Y1-JZTX-V对大鼠背根神经节(DRG)细胞上表达的河豚毒素不敏感型(TTX-R)与河豚毒素敏感型(TTX-S)钠电流均有抑制作用,其半数抑制浓度(IC50)分别为(160±2.5)nmol/L和(39.6±3.2)nmol/L.与天然的敬钊毒素-V相比,该剪切体对大鼠DRG细胞上的TTX-S钠电流的抑制作用基本一致,但对TTX-R钠电流的抑制作用却大大降低,表明敬钊毒素-V分子N-端的酪氨酸残基是一个与TTX-R钠通道结合活性相关的氨基酸残基.

参考文献

[1]	Zeng X Z,Deng M C,Lin Y,Yuan C H,Pi J H,Liang S P.Toxicon,2007,49 (3):388
[2]	Liang S P,Xia Z X,Xie J Y.Science in China Series C:Life Sciences,1997,40 (5):449
[3]	Wang X C,Liang S P,Lou Z M.Acta Biochim Biophys Sin,2000,32(3):275
[4]	Liu Z H,Chen P,Liang S P.Acta Biochimica et Biophysica Sinica(刘中华,陈平,梁宋平.生物化学与生物物理学报),2002,34(4):516
[5]	Liang S P,Shu Q,Wang X C,Zeng X.J Protein Chem,1999,18(6):619
[6]	Xiao Y C,Tang J Z,Hu W J,Xie J Y,Maertens C,Tytgat J,Liang S P.J Biol Chem,2005,280(13):12069
[7]	Xiao Y C,Liang S P.Zoological Research (肖玉成,梁宋平.动物学研究),2002,23(3):200
[8]	Su X,Wachtel R E,Gebhart G F.Am J Physiol,1997,277(6):G1180

上一张下一张

计量

下载量()
访问量()

作者相关

文章评分

您的评分：
1

0%
2

0%
3

0%
4

0%
5

0%

材料期刊网