新型荧光衍生试剂用于尿样中痕量游离雌二醇和雌三醇的反相高效液相色谱-荧光检测和质谱定性

色谱 , 2009, 27(2): 164-168. doi: 10.3321/j.issn:1000-8713.2009.02.007

新型荧光衍生试剂用于尿样中痕量游离雌二醇和雌三醇的反相高效液相色谱-荧光检测和质谱定性

赵怀鑫 ^1, , 孙志伟 ^2, , 夏莲 ^3, , 孙学军 ^4, , 索有瑞 ^5, , 李玉林 ^6, , 尤进茂 ^7,

1.山东省生命有机分析重点实验室,曲阜师范大学化学科学学院,山东,曲阜,273165

2.中国科学院西北高原生物研究所,青海,西宁,810001;中国科学院研究生院,北京,100049

3.中国科学院西北高原生物研究所,青海,西宁,810001;中国科学院研究生院,北京,100049

4.山东省生命有机分析重点实验室,曲阜师范大学化学科学学院,山东,曲阜,273165

5.中国科学院西北高原生物研究所,青海,西宁,810001

6.中国科学院西北高原生物研究所,青海,西宁,810001

7.山东省生命有机分析重点实验室,曲阜师范大学化学科学学院,山东,曲阜,273165;中国科学院西北高原生物研究所,青海,西宁,810001

基金项目: 国家自然科学基金(20075016) 中国科学院"百人计划"项目(328)

关键词： 10-乙基吖啶酮-2-磺酰氯 , 柱前衍生 , 反相高效液相色谱 , 丹磺酰氯 , 雌二醇 , 雌三醇 , 尿

A novel fluorescence reagent for the analysis of trace free oestradiol and oestriol in urine by reversed-phase high performance liquid chromatography with fluorescence detection and mass spectrometry identification

合成了新型高灵敏度的荧光标记试剂10-乙基吖啶酮-2-磺酰氯(EASC).采用EASC柱前衍生化实现了雌二醇(E2)和雌三醇(E3)的反相高效液相色谱(RP-HPLC)-荧光分析及柱后质谱鉴定.试剂EASC比丹磺酰氯(DNS-Cl)具有更高的紫外、荧光和质谱检测灵敏度,其荧光发光强度是丹磺酰氯的 1000 倍以上.EASC与E2和E3在NaHCO3缓冲液(pH 10.5)中,于60 ℃下反应 3 min 即可获得稳定的荧光产物,最大激发波长(λex)和最大发射波长(λem)分别为270 nm和430 nm.所建立的方法具有良好的重现性,线性回归系数大于 0.9990;检出限(S/N=3)为31 fmol 和40 fmol.对实际根田鼠尿样中的雌二醇和雌三醇含量进行了测定,结果令人满意.

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