适于双向电泳分析的苹果叶片蛋白质提取方法

色谱 , 2009, 27(4): 484-488. doi: 10.3321/j.issn:1000-8713.2009.04.021

适于双向电泳分析的苹果叶片蛋白质提取方法

曾广娟 ^1, , 李春敏 ^2, , 张新忠 ^3, , 滕云龙 ^4, , 董文轩 ^5,

1.沈阳农业大学园艺学院,辽宁,沈阳,110161;河北省农林科学院昌黎果树研究所,河北,昌黎,066600

2.河北省农林科学院昌黎果树研究所,河北,昌黎,066600

3.中国农业大学园艺植物研究所,北京,100193

4.沈阳农业大学园艺学院,辽宁,沈阳,110161

5.沈阳农业大学园艺学院,辽宁,沈阳,110161

基金项目: 河北省自然科学基金(C2007000967)

关键词：双向电泳 , 蛋白质提取方法 , 苹果叶片 , 蛋白质组学分析

Efficient protein extraction method from apple leaves for apple proteomic analysis using two-dimensional electrophoresis analysis

为了探索适用于双向电泳(2-DE)分析的苹果叶片蛋白质提取方法,比较了三氯乙酸(TCA)/丙酮沉淀法、二硫苏糖醇(DTT)/丙酮法、Tris-HCl提取法和改良的Tris-HCl提取法等4种蛋白质提取方法.以7 cm、pH 3～10的线性固相pH梯度(immobilized pH gradient,IPG)胶条作为第一向电泳,以十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)(12.5%的分离胶)作为第二向电泳,对提取物进行2-DE分离,采用银染显色.结果表明,上述4种方法在2-DE图谱上分别得到140,215,181和616个蛋白质点.其中以改良的Tris-HCl提取法得到的蛋白质点数最多,且背景清晰、图谱上没有明显的横纵条纹.为了进一步验证改良的Tris-HCl提取法的有效性,用18 cm、pH 3～10的线性IPG胶条和12.5%的分离胶对提取的苹果叶片蛋白质进行2-DE分离,考马斯亮蓝R-250染色,共检测到455个蛋白质点,其相对分子质量主要分布在 14 000～66 000 范围内,图谱背景清晰,再次证明应用该方法制备的样品适用于双向电泳分析,可用于苹果叶片的蛋白质组学分析.

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