5-羟甲基胞嘧啶通过阻止脱氧核糖核酸(DNA)甲基化转移酶l(DMNT1)甲基化胞嘧啶来影响DNA甲基化的程度.本文建立了液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)测定组织中全基因组5-羟甲基胞嘧啶水平的方法.采用苯酚-氯仿提取组织DNA.提取的DNA用88％甲酸在140℃下裂解,DNA裂解液加入同位素胞嘧啶作内标,经N2吹干后,加乙腈(9:1.v/v)溶解,用LC-MS/MS检测5-羟甲基胞嘧啶的含量,并计算全基因组中5-羟甲基胞嘧啶的水乎.结果表明,5-羟甲基胞嘧啶的线性范围为0.1～30 ng/mL,相关系数为0.996 9,检出限(信噪比为3计)和定量限(信噪比为10计)分别为0.057 ng/mL和0.090 ng/mL;日内相对标准偏差和日间相对标准偏差分别为5.13％和6.24％；加标回收率为90.24％～97.53％.用该方法检测了大鼠大脑组织DNA羟甲基化水平,平均结果为0.66％.该方法简便,重现性好,灵敏度较高,能满足全基因组5-羟甲基胞嘧啶定量检测的要求.
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