采用磁性载体制备的固定化酶反应器的载体粒径对蛋白质酶解性能的影响

色谱 , 2013, 31(2): 102-110. doi: 10.3724/SP.J.1123.2012.10019

采用磁性载体制备的固定化酶反应器的载体粒径对蛋白质酶解性能的影响

张姣 ^1, , 周廉淇 ^2, , 田芳 ^3, , 张养军 ^4, , 钱小红 ^5,

1.中南大学药学院,湖南长沙410013;蛋白质组学国家重点实验室,北京蛋白质组研究中心,军事医学科学院放射与辐射医学研究所,北京102206

2.蛋白质组学国家重点实验室,北京蛋白质组研究中心,军事医学科学院放射与辐射医学研究所,北京102206

3.蛋白质组学国家重点实验室,北京蛋白质组研究中心,军事医学科学院放射与辐射医学研究所,北京102206

4.蛋白质组学国家重点实验室,北京蛋白质组研究中心,军事医学科学院放射与辐射医学研究所,北京102206

5.蛋白质组学国家重点实验室,北京蛋白质组研究中心,军事医学科学院放射与辐射医学研究所,北京102206

基金项目: 国家高技术研究发展规划项目(2012AA020202) 国家重大科学计划项目(2012CB910603,2010CB912704) 国家重大科学仪器设备开发专项项目(2011YQ030139,2011YQ06008408,2012YQ12004407) 国家自然科学基金项目(20735005,21275159)

关键词：磁性颗粒 , 固定化酶反应器 , 蛋白质组学 , 蛋白质酶解

Effects of the size of magnetic particles of immobilized enzyme reactors on the digestion performance

研究了以不同粒径的磁性颗粒为载体的固定化酶反应器在蛋白质酶解过程中,其粒径大小对团聚、酶解效率和漏切位点等的影响.实验结果表明,纳米级颗粒的酶负载量为亚微米级的3.5倍左右.但当酶固定量相同时,酶解效率基本相当.而在一定程度上加大磁性颗粒的粒径后,团聚现象得到明显改善.选择磁性载体粒径为20nm的固定化酶反应器,对其性能进一步考察.结果显示胰蛋白酶与牛血清白蛋白(BSA)的质量比为1∶1时,即能于1 min内实现快速酶解；当酶解10 min时,其零漏切位点肽段数和蛋白质序列覆盖率基本达到稳定,并明显优于溶液酶解水平.通过对漏切位点的统计分析比较,发现固定化酶解与溶液酶解时的漏切位点规律基本类似.因此,采用不同粒径磁性载体制备的固定化酶反应器均可在蛋白质组学研究中提供快速、高效的酶解.

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