离子交换色谱-基质辅助激光解吸电离串联飞行时间质谱分离鉴定中国人乳中的β-酪蛋白

色谱 , 2013, 31(5): 429-434. doi: 10.3724/SP.J.1123.2013.01010

离子交换色谱-基质辅助激光解吸电离串联飞行时间质谱分离鉴定中国人乳中的β-酪蛋白

黄宇 ^1, , 任皓威 ^2, , 刘彪 ^3, , 刘宁 ^4, , 李萌 ^5, , 王东茂 ^6,

1.国家乳业工程技术研究中心,黑龙江省乳品工业技术开发中心,黑龙江哈尔滨150028;东北农业大学食品学院,乳品科学教育部重点实验室,黑龙江哈尔滨150030

2.国家乳业工程技术研究中心,黑龙江省乳品工业技术开发中心,黑龙江哈尔滨150028;东北农业大学食品学院,乳品科学教育部重点实验室,黑龙江哈尔滨150030

3.内蒙古伊利实业集团股份有限公司,内蒙古呼和浩特,010110

4.国家乳业工程技术研究中心,黑龙江省乳品工业技术开发中心,黑龙江哈尔滨150028;东北农业大学食品学院,乳品科学教育部重点实验室,黑龙江哈尔滨150030

5.国家乳业工程技术研究中心,黑龙江省乳品工业技术开发中心,黑龙江哈尔滨150028;东北农业大学食品学院,乳品科学教育部重点实验室,黑龙江哈尔滨150030

6.北京蛋白质组研究中心,北京,102206

基金项目: "十二五"国家科技支撑计划项目(2011BAD09B03)

关键词：阴离子交换色谱 , 质谱 , β-酪蛋白 , 纯化 , 中国人乳

Separation and identification of β-casein from Chinese human milk by ion exchange chromatography-matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight/time of flight mass spectrometry

以新鲜中国人乳为研究对象,在酸性条件下加氯化钙分离酪蛋白,用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)法测定分离效果.从pH值、离心力和CaCl2浓度等3个方面对分离效果进行评价.结果表明:当pH =4.3,离心力为10 400 g,CaCl2溶液浓度为60 mmol/L时,分离得到的酪蛋白组分纯度最高.对所得酪蛋白沉淀进行DEAE阴离子交换色谱分离,得到3个洗脱液.对其中第3个峰进行Western-Blot法及基质辅助激光解吸电离串联飞行时间质谱法(MALDI-TOF/TOF MS)鉴定,证明该峰能与人β-酪蛋白抗体特异性结合,确认其为人乳β-酪蛋白；将质谱结果在Mascot数据库中进行数据检索,序列覆盖率为50％,进一步确定其为人乳β-酪蛋白.综上所述,我们建立了能够得到符合蛋白质组学研究要求的人乳β-酪蛋白的方法.

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