蛋白质的还原-烷基化是蛋白质酶切中的重要步骤,常用的烷基化试剂是碘乙酰胺(IAA),但是IAA除了和半胱氨酸发生反应,也可能和其他多种氨基酸发生副反应.我们模拟常规的酶切条件,系统地研究了蛋白质真实酶切时所有酶切肽段发生烷基化的情况.结果表明,多种氨基酸可以发生烷基化,其趋势为:半胱氨酸>肽段N端氨基酸>天冬氨酸>谷氨酸>组氨酸>天冬酰胺>赖氨酸>酪氨酸,同时也发现同一肽段上的氨基酸烷基化具有排他性和聚集性.根据定性结果,采用质谱多反应监测(MRM)技术对多个肽段进行了定量分析,评估了过烷基化对蛋白质定量分析的影响.该研究结果表明,过量的烷基化修饰对蛋白质的定性与定量分析都可能产生较大影响.在蛋白质组学研究的样本处理流程中,应避免样本的过烷基化.
参考文献
[1] | LundellN,Schreitmuller T.Anal Biochem,1999,266(1):31 |
[2] | Defemez M,Mandalari G,Mills E N C.Electrophoresis,2010,31(16):2838 |
[3] | Browmidge P,Beynon R J.Methods,2011,54(4):351 |
[4] | Hustoft H K,Reubsaet L,Greibrokk T,et al.J Pharm Biomed Anal,2011,56(5):1069 |
[5] | Dycka F,Bobal P,Mazanec K,et al.Electrophoresis,2012,33(2):288 |
[6] | Proc J L,Kuzyk M A,Hardie D B,et al.J Proteome Res,2010,9(10):5422 |
[7] | YeX,LiL.Anal Chem,2012,84(14):6181 |
[8] | Ma J,Zhang L,Liang Z,et al.Anal Chim Acta,2009,632 (1):1 |
[9] | Song Z F,Zhang Q L,Zhang Y J,et al.Chinese Journal of Chromatography(宋子凤,张庆林,张养军,等.色谱),2012,30 (6):549 |
[10] | Kuzyk M A,Smith D,Yang J,et al.Mol CellProteomics,2009,8(8):1860 |
[11] | Yang Z,Attygalle A B.J Mass Spectrom,2007,42 (2):233 |
[12] | BojaES,FalesHM.AnalChem,2001,73(15):3576 |
[13] | SunL,Tao D,Han B,et al.Anal Bioanal Chem,2011,399(10):3387 |
[14] | LapkoVN,SmithDL,SmithJB.JMassSpectrom,2000,35(4):572 |
[15] | Woods A G,Sokolowska I,Darie C C.Biochem Biophys Res Commun,2012,419(2):305 |
[16] | Farrah T,Deutsch E W,Omenn G S,et al.Mol Cell Proteomics,2011,10(9):M110.006353 |
[17] | Geiger T,Wisniewski J R,Cox J,et al.Nat Protoc,2011,6(2):147 |
[18] | Williams D K Jr,Meadows C W,Bori I D,et al.J Am Chem Soc,2008,130(7):2122 |
[19] | Williams D K Jr,Comins D L,Whitten J L,et al.J Am Soc Mass Spectrom.2009,20 (11):2006 |
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