氨基己酸为配基的新型弱阳离子交换/疏水双功能色谱固定相对蛋白质的分离纯化

色谱 , 2016, 34(12): 1228-1233. doi: 10.3724/SP.J.1123.2016.08019

氨基己酸为配基的新型弱阳离子交换/疏水双功能色谱固定相对蛋白质的分离纯化

王建山 ^1, , 夏红军 ^2, , 万广平 ^3, , 刘家玮 ^4, , 白泉 ^5,

基金项目: Shaanxi Provincial Science and Technology Co-ordinating Innovation Projects(2013SZS18-K01) 陕西省重点实验室重点科研项目(2010JS103,11JS097,14JS098,15JS115).National Natural Science Foundation of China(21545007) 陕西省科技统筹创新工程计划项目(2013SZS18-K01) Key Research Program of Shaanxi Province Key Laboratory(.2010JS103,11JS097,14JS098,15JS115) 国家自然科学基金项目(21545007)

关键词：固定相 , 混合模式色谱 , 离子交换色谱 , 疏水色谱 , 二维液相色谱

A novel dual-function weak cation exchange/hydrophobic interaction chromatography stationary phase with aminocaproic acid as the ligand for protein separation

Keywords： stationary phase , mixed-mode chromatography (MMC) , ion-exchange chromatography (IEC) , hydrophobic interaction chromatography (HIC) , two-dimensional liquid chromatography (2DLC)

以硅胶为基质、氨基己酸为配基制备了一种新型弱阳离子交换/疏水(WCX/HIC)双功能混合模式色谱固定相.该固定相配基具有一定的疏水性且含有羧基,在高盐浓度下表现为HIC的性质,可作为HIC固定相使用;在低盐浓度条件下表现为离子交换的性质,可作为WCX固定相使用.分别考察了该介质在WCX和HIC两种模式下对标准蛋白质的分离性能,并与商品柱进行比较.结果表明,所合成的WCX/HIC双功能固定相在WCX和HIC两种模式下对蛋白质均有较高的分离度和选择性,且分离能力与商品柱相当,两种模式下标准蛋白质的质量和活性回收率均大于93％,表明该柱具有“一柱二用”的功能,适于生物大分子的分离纯化.基于此双功能色谱柱构建的在线单柱二维液相色谱(2DLC-1C)可在60 min内实现8种蛋白质的快速分离.在70 min内完成了对蛋清中溶菌酶的二维纯化,纯度可达到98.3％.该技术中一根色谱柱可当作两根色谱柱使用,对蛋白质组学研究和重组蛋白药物的生产具有重要的应用价值.

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