重组大肠杆菌细胞不对称还原4-氯乙酰乙酸乙酯合成(R)-(+)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯

催化学报 , 2005, 26(11): 993-998.

重组大肠杆菌细胞不对称还原4-氯乙酰乙酸乙酯合成(R)-(+)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯

敬科举 ^1, , 徐志南 ^2, , 林建平 ^3, , 岑沛霖 ^4,

1.浙江大学化学工程与生物工程学系,浙江杭州,310027

2.浙江大学化学工程与生物工程学系,浙江杭州,310027

3.浙江大学化学工程与生物工程学系,浙江杭州,310027

4.浙江大学化学工程与生物工程学系,浙江杭州,310027

基金项目: 国家高技术研究发展计划(863计划)(20336010)

关键词：重组细胞 , 大肠杆菌 , E.coli BL21(pET28-ALR0105)菌株 , 醛基还原酶 , 生物催化 , 4-氯乙酰乙酸乙酯 , 不对称还原 , (R)-(+)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯

Asymmetric Reduction of Ethyl 4-Chloroacetoacetate to Ethyl (R)-(+)-4-Chloro-3-Hydroxybutyrate by Recombinant Escherichia coli

从赭色掷孢酵母(Sporobolomyces salmonicolor ZJU0105)中克隆出NADPH依赖型醛基还原酶基因,构建了重组大肠杆菌E.coli BL21(pET28-ALR0105), 该工程菌可以高效地表达醛基还原酶. 将重组细胞用于催化4-氯乙酰乙酸乙酯不对称还原,合成出具有光学活性的(R)-(+)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯. 实验发现,在加入适量辅酶及辅酶再生酶的条件下,利用重组细胞催化还原反应可以获得比使用赭色掷孢酵母更高的转化率、产率和ee值,得到了几乎是光学纯的(R)-(+)-型产物,从而解决了酵母细胞催化此类反应ee值较低的问题. 考察了辅酶及共底物的添加、底物和产物的浓度、pH值、温度以及菌体密度等因素对还原反应的影响. 结果表明,不对称还原反应必须在辅酶NADPH和辅酶再生酶系及共底物葡萄糖的参与下进行; 底物和高浓度的产物对还原反应有一定的抑制作用; 当pH＞6.0时,反应的转化率及产率都显著降低; 高密度重组细胞可以减小底物的抑制作用.

参考文献

[1]	Song C E;Lee J K;Lee S H;Lee S .[J].Tetrahedron:Asymmetry,1995,6(05):1063.
[2]	Kitamura M;Ohkuma T;Takaya H;Noyori R .[J].Tetrahedron Letters,1988,29(13):1555.
[3]	Marino JP.;McClure MS.;Holub DP.;Comasseto JV.;Tucci FC. .Stereocontrolled synthesis of (-)-macrolactin A[J].Journal of the American Chemical Society,2002(8):1664-1668.
[4]	Kolb H C;Bennani Y L;Sharpless K B .[J].Tetrahedron:Asymmetry,1993,4(01):133.
[5]	Davies S G;Ichihara O .[J].Tetrahedron:Asymmetry,1996,7(07):1919.
[6]	Hikichi S;Hareau G P-J;Sato F .[J].Tetrahedron Letters,1997,38(48):8299.
[7]	Zhou Y-G;Tang W;Wang W-B et al.[J].Journal of the American Chemical Society,2002,124(18):4952.
[8]	Kataoka M;Yamamoto K;Kawabata H et al.[J].Applied Microbiology and Biotechnology,1999,51(04):486.
[9]	Molinari F;Gandolfi R;Villa R;Occhiato E G .[J].Tetrahedron:Asymmetry,1999,10(18):3515.
[10]	Shimizu S.;Kita K.;Kataoka M. .Chiral alcohol synthesis with yeast carbonyl reductases[J].Journal of molecular catalysis, B. Enzymatic,1998(1/4):321-325.
[11]	Kita K;Kataoka M;Shimizu S .[J].Journal of Bioscience and Bioengineering,1999,88(06):591.
[12]	Sambrook J;Russell D W.Molecular Cloning:A Laboratory Manual[M].Cold Spring Harbor:Cold Spring Harbor Lab Press,2001:1986.
[13]	Windholz M;Buhavari S;Blumitti R F.The Merck Index[M].Rahway:Merck·Co Inc,1983:909.
[14]	杨忠华,姚善泾.水相中酵母细胞催化4-氯乙酰乙酸乙酯不对称还原反应[J].催化学报,2004(06):434-438.
[15]	Dahl AC.;Madsen JO. .Baker's yeast: production of D- and L-3-hydroxy esters[J].Tetrahedron, Asymmetry: The International Journal for Repid Publication on all Aspects of Asymmetry in Orgainc, Inorganic, Organometallic, Physical and Bio-Organic Chemistry,1998(24):4395-4417.

上一张下一张

计量

下载量()
访问量()

作者相关

文章评分

您的评分：
1

0%
2

0%
3

0%
4

0%
5

0%

材料期刊网