陈义烘
,
黄慧敏
,
李任强
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2007.03.009
环节动物的S型凝集素在结构和生化性质上都有别于一般的S型凝集素,其在抗癌等研究方面的潜在价值重大.根据环节动物S型凝集素的性质,采用惰性分子筛填料Sepharose CL-6B(琼脂糖凝胶CL-6B)作为亲和色谱介质对蚯蚓S型凝集素进行了纯化.以2 mmol/L乙二胺四乙酸(EDTA)-MEPBS(4 mmol/L β-巯基乙醇,150mmol/L NaCl,20 mmol/L磷酸盐,pH 7.2)溶液作为平衡液,以氨水(150 mmol/L,pH 10.5)作为洗脱液得到的蛋白质经SDS-PAGE(十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳)、凝血实验及荧光检测等证明了其即为蚯蚓S型凝集素.该方法只需一个步骤即可从蚯蚓提取液中分离到纯的S型凝集素,比传统方法更加快捷高效,优越性明显.该方法的应用将有利于对环节动物S型凝集素的深入研究.
关键词:
琼脂糖凝胶CL-6B
,
亲和色谱
,
一步纯化
,
S型凝集素
,
蚯蚓
秦宗华
,
陈婷
,
李任强
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2012.04002
动物血清中免疫球蛋白和白蛋白的等电点分别约为7.8和4.8,根据它们等电点的较大差别,利用Q SepharoseTM-xL强阴离子交换色谱结合分子排阻色谱同时分离纯化这2种蛋白.以0.02 mol/L pH 8.0的Tris-HCl缓冲液平衡离子交换色谱柱并将已稀释10倍的高免疫的兔血清上样,采用pH分段洗脱.在pH 6.0时以0.3mL/min低流速洗脱得到高纯度的免疫球蛋白,继续在pH 4.0时洗脱,再辅以Sephadex G-75分子排阻色谱可获得纯度大于95％的白蛋白.对纯化后的蛋白进行活性检测,证明所纯化的免疫球蛋白和白蛋白都保持正常的生物活性.蛋白质含量测定说明免疫球蛋白的纯化回收率达到95％以上,而白蛋白的纯化回收率大于90％.该法简便快速,可同时从动物血清中纯化出保持生物活性的免疫球蛋白和白蛋白,纯化效率高.
关键词:
阴离子交换色谱
,
分子排阻色谱
,
免疫球蛋白
,
白蛋白
,
动物血清
,
纯化
