周玮
,
刘晓慧
,
周新文
,
申华莉
,
杨芃原
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2007.05.004
基于高分辨率、高精度、高灵敏度及良好表现力的多级质谱,以标准糖蛋白辣根过氧化物酶(HRP)、核糖核酸酶B(RNase B)为对象,探索了糖蛋白质谱分析前样品处理的技术流程.通过对糖蛋白样品前处理的各个步骤(包括蛋白变性方法(RNase B适合化学变性,HRP适合热变性)、酶的选择及条件(RNase B适用内蛋白酶Lys-C酶解,HRP适用胰蛋白酶酶解,酶解时间控制在12～16 h)、提肽液的组成(对于低丰度糖蛋白用50%乙腈-5%三氟乙酸提取)、基质的组成、点样方法("三明治"式))进行了优化,形成了简单易行、无需糖肽富集标记的糖蛋白溶液酶解-质谱分析和胶上分离酶解-质谱分析的技术路线,为实际样品体系中糖蛋白的结构解析提供了可行的方法.
关键词:
糖蛋白结构
,
质谱解析
,
样品前处理
,
条件优化
陈瑶函
,
晏国全
,
周新文
,
杨芃原
色谱
糖链结构的质谱解析是今后糖蛋白分析中的重要研究内容,其中完整糖肽的分析,由于可以同时获得糖基化位点和对应糖链的结构信息,更具有重要意义和研究前景.本工作对质谱软电离技术在完整糖肽分析中的应用进行了研究,其中包括了基质辅助激光解吸电离(matrix-assisted laser desorption ionization,MALDI)和电喷雾电离(electrospray ionization,ESI)技术.通过平行使用两种串联质谱(tandem mass spectrometry,MS/MS)分析策略:MALDI-MS/MS和ESI-MS/MS对目标糖蛋白--辣根过氧化物酶进行分析,并讨论了其互补性.结果表明,MALDI和ESI技术各有优劣,结合串联质谱分析,可获得糖肽的糖链结构信息;两条路线互补使用,在揭示蛋白质糖基化修饰(位点和结构)的研究中十分必要.
关键词:
基质辅助激光解吸电离质谱
,
电喷雾电离质谱
,
串联质谱
,
液相色谱
,
辣根过氧化物酶
,
糖肽
魏黎明
,
陆豪杰
,
杨芃原
,
武欣
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2013.05030
肽组学作为蛋白质组学研究领域的一个重要分支,在生物标志物发现、疾病早期诊断、生物制药等领域有着广阔的应用前景.在肽组学研究过程中,样品前处理是首要环节.本文对肽组学样品前处理方法与技术进行了综述,内容涉及超滤技术、有机溶剂沉淀方法、固相萃取技术等.样品中大量高丰度蛋白质的存在是肽组学发展面临的最大挑战,因此迫切需要发展快速、有效、高通量、自动化的样品前处理方法和技术.
关键词:
肽组学
,
低分子量蛋白质
,
多肽
,
样品前处理
陆文渊
,
张扬
,
沈诚频
,
殷薛飞
,
刘晓慧
,
杨芃原
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2013.10030
在使用对二甲基亚砜（ DMSO）和 NEDD8激活酶抑制剂（ MLN4924，MLN）刺激的人脐静脉内皮细胞（ HU-VEC）内的蛋白质进行分析的过程中，利用 Progenesis LC-MS 软件对色谱图进行了保留时间的校正，并比较了同组分多次重复实验中的谱图相似率及两种刺激下细胞内蛋白质色谱图的相似度。样品经双酶切处理后，加入 Qcon-CAT 标准蛋白质混合物作为参照，经高效液相色谱-串级质谱分离，后续又对谱图进行了校正与分析。经过谱图校正，将蛋白质鉴定结果从7000个左右提高到8000个以上，提高了蛋白质的鉴定效率。在利用谱图计数进行相对定量时，还分析了 DMSO 和 MLN 分别刺激 HUVEC 后细胞内的蛋白质差异在1000个左右，并给出了校正后的色谱总离子流图的相似度比较。相比其他方法更为简单快捷和流程化，具有高通量高灵敏度的优点。
关键词:
高效液相色谱-串级质谱
,
谱图校正
,
蛋白质分析
