卜春苗
,
王有贤
,
龚波林
,
阎超
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2008.03.024
以3.0 μm无孔单分散亲水性交联聚甲基丙烯酸环氧丙酯树脂为基质,与三嗪染料活性蓝F3GA(Cibacron Blue F3GA)反应,制备出一种固定化染料聚合物高效亲和色谱填料.考察了应用该填料时流动相中的盐离子浓度、有机溶剂及流速等对牛血清白蛋白(BSA)和溶菌酶(Lys)保留行为的影响.实验结果表明,该染料亲和填料具有良好的色谱性能.利用前沿色谱法测定了染料与溶菌酶之间的表观解离常数为5.26×10-5 mol/L.使用该填料成功地从鸡蛋清和小牛血清中分别分离纯化了Lys和BSA,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析显示Lys和BSA的纯度分别为95%和92% .
关键词:
无孔单分散亲水性树脂
,
染料亲和色谱
,
固定相
,
蛋白质
,
纯度
朱金霞
,
卜春苗
,
龚波林
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2006.02.005
采用分散聚合法制备小颗粒种子及"一步种子溶胀聚合"法成功地制备了粒径为3.0 μm的无孔单分散亲水性交联聚甲基丙烯酸环氧丙酯树脂,其表面经水解、环氧化、再水解后与氯磺酸反应,制备了一种新型的强阳离子交换色谱填料(SCX).详细考察了该填料对标准蛋白质的分离性能及流动相中盐的种类、有机溶剂、流速等对蛋白质保留的影响.实验结果表明,在流速为4 mL/min时,采用线性梯度洗脱,1.0 min内可快速分离4种标准蛋白质,蛋白质的保留符合阳离子交换色谱规律.将SCX应用于快速纯化鸡蛋清中的溶菌酶和猪心中的细胞色素-C,取得了较好的效果.
关键词:
无孔单分散亲水性聚合物微球
,
强阳离子交换色谱
,
蛋白质分离
