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疏水作用色谱中流动相组成对溶质保留行为的影响

赵建国 , 姚丛 , 卫引茂 , 耿信笃

色谱 doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2001.06.001

首次研究了疏水作用色谱(HIC)中芳香醇同系物在不同种类盐流动相中的保留行为.以计量置换保留模型中的参数Z分析了HIC中小分子与生物大分子保留行为的差别,以及不同流动相组成对两种类型溶质的洗脱范围及洗脱能力的影响.与反相色谱相似,芳香醇在HIC中的保留仍存在同系物规律.比较了小分子和生物大分子在不同盐溶液中的Z值变化,表明流动相中的盐仅改变小分子与固定相的水合程度,而对生物大分子,除改变其和固定相水合程度外,还会影响生物大分子与固定相接触区的分子构象.

关键词: 疏水作用色谱 , 芳香醇同系物 , 生物大分子 , 保留

用疏水色谱法从猪心中快速制备高纯度的细胞色素C

姚丛 , 柯从玉 , 白泉 , 卫引茂 , 耿信笃

色谱 doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2004.04.027

提出了一种从猪心中快速制备高纯度细胞色素C的方法.使用一种装有大颗粒疏水填料的简易型疏水色谱柱在实验室规模对细胞色素C进行了纯化,通过反相色谱、紫外光谱及铁含量对样品的纯度进行了检验.与经典方法相比,此方法纯化工艺简单、操作时间短,细胞色素C的质量回收率高,纯度好.

关键词: 疏水色谱 , 细胞色素C , 纯化 , 柱技术

多羟基化合物键合亲水色谱固定相的制备及其分离性能

张静 , 王玲玲 , 单联国 , 卫引茂

色谱 doi:10.3724/SP.J.1123.2012.03040

用硅胶与氨丙基三甲氧基硅烷反应,再与δ-葡萄糖酸内酯反应,制备了一种多羟基化合物键合的新型亲水色谱固定相.以水-有机溶剂(乙醇、乙腈、四氢呋喃)为流动相,通过改变流动相中有机溶剂的种类及浓度、缓冲盐浓度和柱温,考察了该固定相对6种强极性中药组分的保留行为和保留机理.当水的比例在0~ 40% (v/v)范围时,溶质的保留随着流动相中水的比例的增大而减小,属于典型的亲水色谱分离模式;而当流动相中水的比例在0 ~100% (v/v)范围内变化时,溶质的保留随着水的比例变化呈“U”形曲线,属于亲水色谱和反相色谱的混合保留机理.缓冲盐的浓度和pH效应说明,所选用的中药组分与所制备的固定相间还存在弱的静电作用.该固定相对6种中药组分以及丹参注射液具有良好的分离性能,表明其在强极性中药有效成分的分离及其他强极性物质的分离分析中具有一定的应用前景.

关键词: 亲水作用色谱 , 多羟基化合物固定相 , 强极性中药组分 , 色谱保留行为

氨基双四唑型金属螯合磁性纳米粒子的制备及其对蛋白质的吸附性能

单丙辉 , 王超展 , 卫引茂

分析化学 doi:10.11895/j.issn.0253-3820.160125

通过4步化学反应对磁性Fe3O4@SiO2纳米粒子进行化学修饰,设计和制备了一种N,N'-二(5-四唑亚甲基)胺修饰的金属螯合磁性纳米粒子。用X射线光电子能谱(XPS)、Zeta电位对该新型吸附剂进行了表征。用静态吸附法研究了螯合Cu吸附剂对溶菌酶、细胞色素C和α-糜蛋白酶的吸附性能以及溶液pH值、盐浓度、蛋白初始浓度对吸附量的影响。结果表明,吸附剂对蛋白质的吸附主要通过金属配位机理进行,且符合Langmuir吸附模型,对溶菌酶、细胞色素C和α-糜蛋白酶的最大吸附量分别20.0、13.5和17.9 mg/g。此外,将螯合Cu(Ⅱ)吸附剂用于混合蛋白质样品的吸附,发现此吸附剂对混合蛋白质样品中的溶菌酶具有选择性吸附作用,说明此金属螯合吸附剂在蛋白质选择性分离富集中具有一定应用价值。

关键词: 磁性分离 , 金属螯合 , 吸附剂 , 蛋白质

前沿色谱法对盐酸小檗碱和固定化牛血清白蛋白结合作用的研究

曾晓蕾 , 雷根虎 , 卫引茂

色谱 doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2007.03.013

盐酸小檗碱(BC)是黄连的主要有效成分,它具有抗菌消炎等多种作用.采用前沿色谱法测定了不同温度下BC与固定化牛血清白蛋白(BSA)的结合常数K和结合率PPB、BC的保留因子k、BC在色谱柱上活性位点的物质的量mL,以及BC与BSA结合过程中的热力学参数.在温度为30℃时,BC与BSA的结合常数为4.79×104L/mol.K、k和mL均随温度的升高而降低,其中以mL的变化程度最为显著,表明k的降低是由于K与mL共同作用的结果.而BSA分子构象变化可能是mL降低的主要原因.热力学分析结果表明:BC和BSA之间的作用力以静电作用力为主.

关键词: 前沿色谱 , 盐酸小檗碱 , 牛血清白蛋白 , 结合常数

高效亲和色谱法测定丹皮酚与固定化人血清白蛋白结合域

于雪 , 张君才 , 卫引茂

色谱 doi:10.3724/SP.J.1123.2010.00688

利用亲和色谱,在模拟人体生理环境下(37 ℃、pH 7.4),采用竞争置换法研究了丹皮酚(PAE)与固定化人血清白蛋白(HSA)的相互作用.通过对PAE的自我竞争分析及PAE与HSA上结合位点的标记物间的竞争置换分析,得到了PAE和HSA间的结合常数、结合位点数和结合域.结果表明:PAE在HSA分子中仅存在一类结合位点,结合常数为4.84×103 L/mol,该结合位点为HSA上的Sudlow siteⅡ;通过对PAE与HSA相互作用的热力学研究,推断出二者间的作用力类型为氢键或范德华力.

关键词: 高效亲和色谱 , 竞争置换分析 , 丹皮酚 , 人血清白蛋白

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