张曼玉
,
王春丽
,
边阳阳
,
程凯
,
卫晓鸾
,
叶明亮
,
邹汉法
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2011.00706
模体是蛋白质二级结构上的一种特征序列,激酶底物通常具有一类特征性的模体,识别底物模体对鉴定激酶底物具有重要意义.为了快速鉴定激酶底物模体,将全细胞蛋白质酶解液作为肽段文库的来源,采用碱性磷酸酶去除肽段的固有磷酸化后构建了用于筛选激酶底物模体的肽段文库.该肽段文库是大最非磷酸化肽段的混合物,将此混合肽段与酪蛋白激酶2和 三磷酸腺苷作用30 min后,通过固定化金属离子亲和色谱法富集磷酸化肽段,采用反相液相色谱-串联质谱分析,成功地鉴定到472条非冗余底物肽段,包含451个非冗余磷酸化位点,并山此得到底物模体S/T-D/E-x-D/E.该法能够快速准确地筛选出激酶底物模体,对研究激酶-底物识别以及信号转导过程具有重要意义.
关键词:
固定化金属离子亲和色谱
,
反相液相色谱-串联质谱
,
模体
,
激酶
,
肽段文库
,
蛋白质组学
郑昊
,
毛家维
,
潘彦博
,
刘忠山
,
刘哲益
,
叶明亮
,
邹汉法
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2014.01003
赖氨酸胍基化在蛋白质组学定性和定量研究中起着重要作用，本文系统分析了胍基化前后，HeLa 细胞蛋白质经胰蛋白酶酶解产生的3种不同类型肽段的质谱鉴定情况，并探讨了不同肽段质谱响应改变的内在原因。发现赖氨酸在侧链能选择性地发生胍基化反应（其选择性达到96.8％），转化为高精氨酸，碱性增强。因此在正离子质谱模式下，C 端为赖氨酸的肽段产生了更多的 y 离子，提供了许多新的离子碎片信息。在鉴定结果中，此类肽段所占总肽段的比例由原来的51.7％上升为57.3％，并且有1015条新的肽段被检测到。对于不含有赖氨酸的肽段，其鉴定结果在胍基化前后基本没有变化。结果表明，胍基化可以在一定程度上提高质谱鉴定的灵敏度和互补性，提高蛋白质分析的覆盖率。
关键词:
质谱
,
蛋白质组学
,
胍基化
,
肽段碎裂
叶明亮
,
邹汉法
,
刘震
,
雷政登
,
倪坚毅
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2000.06.013
提出了一种新的亲和色谱模式开管毛细管亲和液相色谱.在内径为50μm的毛细管内表面键合一层三嗪染料配体,利用毛细管电泳仪的压力系统进行亲和色谱实验.采用流动相切换洗脱技术,牛血清白蛋白和溶菌酶获得了有效的分离.连续运行10次,溶菌酶的出峰时间、峰面积和峰高的相对标准偏差分别为0.1%,4.3%,3.7%.在8.6ng～28.7ng范围内,溶菌酶的进样量与峰面积和峰高都呈线性关系,其相关系数分别为0.9946和0.9988.
关键词:
亲和色谱
,
开管柱
,
三嗪染料
,
溶菌酶
吴仁安
,
邹汉法
,
叶明亮
,
熊博晖
,
倪坚毅
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2001.03.001
采用原位聚合的方法在毛细管中合成了非电荷型连续床电色谱原位柱,通过在电色谱流动相中加入阴离子表面活性剂十二烷基硫酸钠(SDS)进行动态改性使其产生电渗流,考察了SDS浓度及有机改性剂浓度等因素对电渗流的影响.此类连续床柱制备容易,柱效可达14万理论塔板/m,在不同的操作条件下有良好的稳定性,连续10次运行,其死时间to与保留时间的精密度分别为0.22%和＜0.56%.
关键词:
原位聚合
,
非电荷型毛细管电色谱柱
,
阴离子表面活性剂
,
电渗流
叶明亮
,
邹汉法
,
雷政登
,
吴仁安
,
倪坚毅
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2001.05.002
将牛血清白蛋白(BSA)吸附于强阴离子交换固定相(SAX)上用于电色谱手性分离.当SAX吸附BSA后,电渗淌度仅仅下降26.3%,而电渗流的方向没有改变.在该系统中电渗流的方向和阴离子的电泳方向一致,因而克服了一般蛋白质固定相不能分离酸性对映体的缺点.1种中性对映体安息香和4种阴离子性对映体色氨酸、华法令、非诺洛芬、酮基布洛芬获得了成功分离.当流动相含体积分数为7%的乙腈时,死时间和D-色氨酸、L-色氨酸的迁移时间的相对标准偏差分别为0.90%,0.87%和0.96%(n=21),说明该体系有很好的重现性.为了缩短分析时间,将正己酸作为顶替试剂加入流动相中,结果发现对映体的保留下降很快而手性选择性减小缓慢.此外,还考察了乙腈的体积分数对分离的影响.
关键词:
毛细管电色谱
,
手性分离
,
蛋白质的吸附
邹汉法
,
吴明火
,
王方军
,
吴仁安
,
叶明亮
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2009.05.003
整体柱是通过在柱管内原位聚合或固化的方法制备得到的具有多孔结构的整体棒状固定相,与传统的填充柱相比,具有通透性好、传质速率快、容易制备等优点,因此在分离分析领域特别是生物分离分析中发挥的作用日益增大.整体柱的制备及应用近年来也得到了快速发展,层出不穷的新型整体柱已被广泛用于色谱高效分离分析、固相萃取及酶反应器等方面,大大推动了分离分析科学的发展.本文主要总结了近五年来整体柱的制备技术及其在蛋白质组学应用中的一些最新研究进展.
关键词:
整体柱
,
制备
,
色谱分离
,
蛋白质组学
,
综述
谢沙洁
,
王方军
,
晏丹
,
周广东
,
叶明亮
,
邹汉法
色谱
将已建立的 7 cm 柱长的磷酸基团强阳离子交换富集整体柱与85 cm柱长的C12烷基反相整体柱结合的在线二维分离平台应用于软骨提取蛋白的蛋白质组分析.对20 μg软骨提取蛋白的酶解产物进行14个盐梯度的分级,然后对14个馏分进行反相色谱梯度分离及串联质谱鉴定,成功地鉴定得到了 7 434 个独立肽段对应的 1 901 个非冗余蛋白质.对所鉴定到的蛋白质进行定位分类,结果表明鉴定到的大部分蛋白质是来自于软骨细胞内部的低丰度蛋白质,这对于许多关节类疾病的研究有重要意义.
关键词:
整体柱
,
在线二维分离
,
蛋白质组学
,
软骨组织
刘宏伟
,
赵鑫
,
程凯
,
赵宗宝
,
叶明亮
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2011.00382
斯达氏油脂酵母能在细胞内合成大量的油脂,其细胞内的脂类物质影响着蛋白质提取和后续的蛋白质组学分析.常见的一步蛋白质提取法很难从含有大量油脂的斯达氏酵母细胞中提取蛋白质,因此其蛋白质组学分析的结果较差.本文发展了顺序提取法提取斯达氏酵母中的蛋白质,并采用在线多维微柱反相液相色谱-串联质谱联用技术分析其蛋白质组;共鉴定到227个高可信度的蛋白质,其数目是一步提取法的两倍;此外,所鉴定到的参与基础代谢的蛋白质数目比一步提取法也显著增加.此方法可以有效提取含大量油脂的物种中的蛋白质,为油脂积累的分子机制研究提供重要的信息.
关键词:
在线多维微柱反相液相色谱-串联质谱
,
样品前处理
,
顺序提取
,
蛋白质组分析
,
斯达氏油脂酵母
程凯
,
王方军
,
边阳阳
,
叶明亮
,
邹汉法
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2014.10019
磷酸化修饰的分析一直是蛋白质组学研究的热点之一。在鸟枪法的蛋白质组学研究中，通过在数据库检索中设定磷酸化为可变修饰可以直接鉴定磷酸化修饰的位点。但是翻译后修饰的引入会增加数据检索空间，造成鉴定灵敏度的降低。为了解决这一问题，我们构建了一种位点注释的数据库，这种数据库包含蛋白质的磷酸化位点信息，并开发了一种新的数据库检索策略用于磷酸化肽段的可靠鉴定。用不同类型的数据作为分析对象，通过Mascot检索软件对这种新的数据库检索策略进行了考察，证明了这种方法在保证鉴定结果可靠性的前提下提高了磷酸化肽段鉴定的灵敏度。
关键词:
蛋白质组学
,
磷酸化
,
检索空间
,
位点注释
