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在线衍生-高效液相色谱法同时测定血浆中的色氨酸及其代谢物

冯成亚 , 高洁莹 , 甄乾娜 , 樊子勉 , 朱明松 , 杨香春 , 丁敏

色谱 doi:10.3724/SP.J.1123.2013.01054

建立了醋酸锌在线衍生高效液相色谱法同时测定血浆中色氨酸(Trp)、犬尿氨酸(Kyn)、5-羟吲哚乙酸(5-H iaa)和犬尿喹啉酸(Kyna)的方法.以3-硝基酪氨酸为内标(IS),采用Hypersil C-18柱(250 mm×4.0 mm,5μm),以250 mmol/L醋酸锌溶液(pH 5.5)-乙腈(95∶5,v/v)为流动相,流速为0.8 mL/min,柱温30℃.荧光检测波长设定:5-Hiaa为278 nm(λex)/343 nm(λem),Kyna为244 nm(λex)/400 nm(λem);紫外检测波长设定:Kyn和IS为360 nm,Trp为302 nm.4种物质的回收率在91.62%~114.17%之间;线性范围分别为2.50 ~ 320.00μmol/L(Trp),0.32~15.36 μmol/L(Kyn),3.27 ~ 104.60 nmol/L(5-Hiaa),14.00 ~ 464.80 nmol/L(Kyna);检出限分别为0.078 μmol/L(Trp),0.056 μmol/L(Kyn),0.690 nmol/L(5-Hiaa),1.290 nmol/L(Kyna).利用该方法对30例正常孕妇和28例女性健康志愿者的血浆进行测定,结果表明两组间Trp,Kyn和Kyna含量有显著性差异.该方法操作简便,重复性好,灵敏度高,适合于临床检测.

关键词: 高效液相色谱法 , 色氨酸 , 犬尿氨酸 , 5-羟吲哚乙酸 , 犬尿喹啉酸 , 血浆

柱前衍生高效液相色谱-荧光检测法测定血浆中同型半胱氨酸

唐秀芳 , 甄乾娜 , 樊子勉 , 冯成亚 , 丁敏

色谱 doi:10.3724/SP.J.1123.2012.03026

建立了一种柱前衍生高效液相色谱-荧光检测法用于测定血浆中同型半胱氨酸(Hcy).使用三(2-羧乙基)膦盐酸盐(TCEP)为还原剂,N-(1-芘)马来酰亚胺(NPM)为衍生剂进行样品预处理,Agilent Hypersil C-18柱(250mm ×4.0 mm,5μm)进行分离,流动相为15 mmol/L醋酸钠-乙腈-混合酸(300 mL水中含1mL醋酸和1mL磷酸)混合溶液,采用梯度洗脱,荧光检测激发波长为330nm,发射波长为380 nm.Hcy的回收率为(102.08±4.94)%.线性范围为0.500~100μmol/L,检出限(以信噪比为3计)为0.016μmol/L.日内与日间相对标准偏差均小于5%.利用该方法对7例高血压患者和7例健康志愿者的血浆进行了测定,结果表明两组间的Hcy含量存在显著的差异(p<0.05).本方法简单、快速、灵敏、特异,适用于血浆Hcy的临床定量测定.

关键词: 高效液相色谱 , 荧光检测 , 同型半胱氨酸 , 血浆

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