张强
,
邹汉法
,
陈小明
,
汪海林
,
倪坚毅
,
张曾子
,
姚平径
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2001.01.003
采用三聚氯氰为活化剂分别合成了牛血清白蛋白（BSA）、人血清白蛋白（HSA）和β-环糊精手性固定相，研究了温度在色氨酸,华法令，酮基布洛芬和丹酰化苏氨酸手性拆分中的影响。结果表明，在蛋白手性固定相上对映体间的熵变对色氨酸,华法令和酮基布洛芬的拆分有很大的影响，而丹酰化苏氨酸对映体在β-环糊精手性固定相上的拆分为典型的焓控过程，与蛋白柱有着不同的热力学特性。由于键合方式不同，色氨酸在我们合成的BSA手性固定相上的最佳分离温度为35℃左右，而不是文献报道的以戊二醛为活化剂的24℃。
关键词:
蛋白固定相
,
β-环糊精固定相
,
热力学
,
手性拆分
汪海林
,
章大鹏
,
王智鑫
,
李涛
,
冯峰
,
王超
,
高海燕
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2009.05.015
DNA加合物是一类重要的生物标志物,可应用于人体致癌物暴露监测、癌症风险评价和人群易感性研究.DNA加合物作为生物标志物的应用需要安全、灵敏、快速的先进分析技术.我们利用免疫毛细管电泳-激光诱导荧光分析,发展了高灵敏的DNA加合物分析方法和技术.本文主要介绍了相关的仪器研制及方法学研究.方法学研究涉及DNA加合物荧光探针的合成和表征、抗体与DNA加合物的相互作用及其结合计量学、抗原-抗体复合物的稳定化和DNA驱动电泳聚焦技术.
关键词:
毛细管电泳
,
激光诱导荧光
,
DNA加合物
,
生物标志物
张月侠
,
宋茂勇
,
李涛
,
赛道建
,
汪海林
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2009.03.016
以一种高亲和力适配体作为亲和荧光探针,以自建的毛细管电泳-激光诱导荧光(CE-LIF)检测装置为基础,建立了一种高灵敏、快速测定人凝血酶的方法.荧光标记的凝血酶适配体特异性地与凝血酶结合并形成稳定的凝血酶-适配体复合物,采用CE-LIF对复合物进行分离检测,从而测定凝血酶浓度.探讨了盐离子种类及浓度对适配体与凝血酶结合的影响,并在选定的电泳条件下对凝血酶检测的线性范围、检出限和重现性进行了测定.结果表明,盐离子存在的条件下适配体与凝血酶的亲和力降低,不利于两者的结合;人血清溶液中,凝血酶浓度在0.25～10 nmol/L 范围内与复合物峰面积具有良好的线性相关性(r2=0.991),检出限(S/N=3)为55.6 pmol/L;精密度和回收率测定结果均能满足分析的要求.
关键词:
亲和毛细管电泳
,
激光诱导荧光检测
,
凝血酶
,
适配体
,
血清
宋玉玲
,
汪海林
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2010.01123
发展了一种超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)检测脱氧核糖核酸(DNA)分子中8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)的方法.DNA分子在酶解过程中,脱氧鸟苷(dG)易被氧化形成8-OHdG,从而使得8-OHdG的检测结果不准确.通过加入甲磺酸去铁铵作为保护剂,有效地避免了酶解过程造成的dG氧化.酶解液通过超滤膜(截留相对分子质量为 3000的分子)处理,有效去除大量蛋白分子后,直接进行UPLC-MS/MS测定.采用外标法定量,在17.6～1400 fmol范围内,8-OHdG的峰面积与其物质的量具有良好的线性关系,相关系数为 0.9998.利用本方法测定了小牛胸腺DNA中8-OHdG的含量(用比值8-OHdG/106dG表示)为12.9±2.35,与前人报道的检测结果一致.本方法也可以应用于评价各种氧化因素引起的DNA氧化损伤.
关键词:
超高效液相色谱-串联质谱
,
8-羟基脱氧鸟苷
,
脱氧鸟苷
,
脱氧核糖核酸
,
小牛胸腺
刘胜权
,
汪海林
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2011.00816
毛细管电泳以其分析速度快、分离效率高、操作简便、能够实现高通量而获得了广泛的应用,但由于检测窗口小而导致其检测灵敏度低.为了提高检测灵敏度,目前已发展了多种毛细管电泳在线聚焦和样品预浓缩技术,如场放大样品堆积、pH调节浓缩、胶束电动毛细管色谱、等速电泳等.这些技术由于能够在毛细管内同时实现样品的聚焦和分离、操作简便而获得J广泛的兴趣和关注.本文针对毛细管电泳的在线聚焦的原理、技术和应用做一简要的介绍和总结.
关键词:
毛细管电泳
,
在线聚焦
,
预浓缩
,
堆积
,
综述
朱会宇
,
吴丹妮
,
汪海林
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2016.08031
研究了三磷酸腺苷（ ATP）及其代谢物在细胞内的含量以及2?叔丁基?1，4?苯醌（ TBBQ）对ATP及其代谢产物在细胞内含量的影响。建立了一种高效液相色谱法（ HPLC）用于快速分离、检测细胞内ATP及其代谢产物（二磷酸腺苷（ ADP）和一磷酸腺苷（ AMP））的含量。使用岛津高效液相系统及艾杰尔Venusil MP C18柱，采用等度洗脱的方式。流动相A相为50 mmol／L磷酸氢二钠和15 mmol／L三甲胺（ TEA），用醋酸（ HAc）调节pH至7?88；流动相B相为甲醇。采用建立的高效液相色谱法得到了3种代谢物的工作曲线，相关系数高（R2≥0?9996）， MRC?5细胞中3种代谢物的含量均在线性范围（0?1～100μmol／L）内。该方法检出限低。采用预冷的80％（体积分数）甲醇水溶液提取细胞内的代谢物。该研究建立的方法成功地应用于检测MRC?5细胞中的ATP、ADP和AMP的含量，结果表明，TBBQ会对ATP、ADP、AMP在细胞内的含量产生影响，但 TBBQ浓度和 ATP、ADP以及 AMP在MRC?5细胞内浓度的关系比较复杂。
关键词:
高效液相色谱
,
三磷酸腺苷
,
醌类
,
代谢产物
,
细胞内
