单丙辉
,
王超展
,
卫引茂
分析化学
doi:10.11895/j.issn.0253-3820.160125
通过4步化学反应对磁性Fe3O4@SiO2纳米粒子进行化学修饰,设计和制备了一种N,N'-二(5-四唑亚甲基)胺修饰的金属螯合磁性纳米粒子。用X射线光电子能谱(XPS)、Zeta电位对该新型吸附剂进行了表征。用静态吸附法研究了螯合Cu吸附剂对溶菌酶、细胞色素C和α-糜蛋白酶的吸附性能以及溶液pH值、盐浓度、蛋白初始浓度对吸附量的影响。结果表明,吸附剂对蛋白质的吸附主要通过金属配位机理进行,且符合Langmuir吸附模型,对溶菌酶、细胞色素C和α-糜蛋白酶的最大吸附量分别20.0、13.5和17.9 mg/g。此外,将螯合Cu(Ⅱ)吸附剂用于混合蛋白质样品的吸附,发现此吸附剂对混合蛋白质样品中的溶菌酶具有选择性吸附作用,说明此金属螯合吸附剂在蛋白质选择性分离富集中具有一定应用价值。
关键词:
磁性分离
,
金属螯合
,
吸附剂
,
蛋白质
吴丹
,
王超展
,
耿信笃
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2007.02.014
蛋白折叠液相色谱法(PFLC)用于变性蛋白质复性并同时纯化时对流动相组成及其洗脱条件的要求远较通常的液相色谱法高.用端基为PEG-200的高效疏水作用色谱固定相对重组人干扰素-γ(rhIFN-γ)进行纯化并同时复性,详细研究了流动相组成、梯度洗脱模式和流速对rhIFN-γ质量回收率和活性的影响.分别以3.0 mol/L(NH4)2SO4+0.05 mol/L KH2PO4(pH 7.0)和0.05 moL/L KH2PO4(pH 7.0)为流动相A和B,采用35 min非线性梯度洗脱时,所得rhlFN-γ的质量回收率最高.
关键词:
高效疏水作用色谱法
,
流动相组成
,
梯度洗脱模式
,
纯化
,
复性
,
质量回收率
,
重组人干扰素-γ
王超展
,
王骊丽
,
耿信笃
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2007.04.014
用蛋白折叠液相色谱法(PFLC)对大肠杆菌表达的包涵体形式的重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)进行了复性并同时纯化.用Cu2+-亚氨基二乙酸(IDA)Sepharose作为固定化金属离子亲和色谱的固定相.在低浓度脲存在下,以咪唑为洗脱剂,采用线性梯度洗脱rhG-CSF.该法仅通过一步PFLC分离,减少了复性过程中rhG-CSF的聚集,复性后的rhG-CSF的比活性为1.8×108 IU/mg,纯度为97%,质量回收率为32%.
关键词:
固定化金属离子亲和色谱
,
蛋白折叠
,
纯化
,
重组人粒细胞集落刺激因子
,
大肠杆菌
王骊丽
,
王超展
,
耿信笃
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2011.00036
为了提高重组人干细胞因子(rhSCF)的复性效率,改进了高效疏水相互作用色谱(HPHIC)纯化和复性rhSCF的方法.首先将目标蛋白溶解于8.0 mol/L 脲中,然后将rhSCF包涵体的提取液直接进样到不同规格的HPHIC柱进行纯化和复性.优化了固定相配基结构和流动相组成等实验条件,结果表明,本方法可以快速地获得高质量回收率和高生物活性的rhSCF,rhSCF在40 min内即可完成复性与纯化,目标蛋白的纯度在95.5% 以上,质量回收率高于49.6% .通过体积排阻色谱和基质辅助激光解吸离子化飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)的分析,确认rhSCF以单体存在.结果进一步证明HPHIC法是同时复性和纯化重组蛋白的有效工具.
关键词:
高效疏水相互作用色谱
,
重组人干细胞因子
,
包涵体
