刘曙照
,
韦林洪
,
徐维娜
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2005.02.004
Sepharose CL-4B经碳酰二咪唑(CDI)活化后与纯化的克百威抗体共价偶联,合成了免疫亲和色谱(IAC)固定相,并用其制备了对克百威具有特异性亲和力的IAC柱.对IAC条件进行了优化,选择0.02 mol/L pH 7.2磷酸盐缓冲液(PB)作为吸附与平衡介质,60%(体积分数)甲醇水溶液作为洗脱剂.结果表明:在优化条件下,IAC柱对克百威的动态柱容量达1.58 mg/L.当标样溶液中克百威质量浓度低于 2 μg/L时,经IAC柱富集的效率高于167倍.在河水中按0.1 mg/L水平添加克百威标准品,经IAC柱分离富集,洗脱液采用包被抗体直接竞争酶联免疫吸附分析(ELISA)法检测,5次重复测定的平均回收率为89.8% ,相对标准偏差为4.8% .同时采用高效液相色谱(HPLC)法测定洗脱液,与ELISA法测定结果基本一致.
关键词:
免疫亲和色谱
,
酶联免疫吸附分析
,
高效液相色谱
,
克百威
陈亮
,
陈婷
,
徐强
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2006.03.007
为了获得剔除柚皮苷(naringin)的中药方剂四逆散样品以供其药理活性探讨时使用,制备了抗柚皮苷抗体的免疫亲和色谱柱,用于特异性地剔除四逆散中的柚皮苷.首先合成了柚皮苷的完全抗原柚皮苷与牛血清白蛋白的结合物naringin-BSA,并用naringin-BSA对新西兰兔进行免疫获得抗血清,再将其纯化后与经CNBr活化的Sepharose 4B凝胶共价偶联制成免疫亲和色谱柱.将四逆散提取物样品溶液上样该色谱柱,洗脱,制得特异性剔除了柚皮苷的四逆散样品.由检测结果可知,naringin-BSA被成功合成.将其用于免疫新西兰兔,获得的抗血清的效价经酶联免疫吸附法(ELISA)测定达到1∶30000,抗体IgG的纯度达94% ,交叉反应率低.在IgG与Sepharose 4B合成的IgG-Sepharose免疫亲和色谱柱中,IgG的偶联率为87% .用该免疫亲和色谱柱处理四逆散后,其中所含的柚皮苷几乎完全被剔除.结果证明,利用抗柚皮苷免疫亲和色谱,能特异性地剔除四逆散或其他样品中的柚皮苷成分.
关键词:
免疫亲和色谱
,
柚皮苷
,
完全抗原
,
特异性剔除
,
四逆散
周月芳
,
张焱
,
罗坚
,
康丽梅
,
陈毅
,
石红
,
孟庆雄
,
苏志国
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2013.03026
乳腺生物反应器可以高效表达重组人单克隆抗体,但是目标产品与乳液原料中的牛抗体性质、结构非常类似,分离难度很大.本文对牛抗体和重组人抗体的种属差异进行了分析,并在此基础上制定了新型分离策略,采取Protein A亲和色谱和免疫亲和色谱来解决混合抗体的分离问题,并讨论了色谱洗脱模式对分离效果的影响.结果表明,Protein A亲和色谱结合梯度洗脱可以有效地纯化得到混合抗体,但是难以彻底分离重组人抗体和牛抗体；相比之下,使用Protein A亲和色谱结合置换色谱模式可以更加高效地分离混合抗体,最终可以得到纯度高达95％以上的重组人抗体,回收率可达95％以上.免疫亲和色谱同样可以有效地分离纯化重组单克隆抗体,且其通用性更强,可以应用于任何动物乳腺表达重组人抗体的分离纯化中.
关键词:
Protein A亲和色谱
,
免疫亲和色谱
,
重组人抗体
,
牛抗体
,
乳腺生物反应器
