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复用血液透析器(人工肾)膜表面粘附蛋白的实验研究

杨瑜静 , 谷雪莲 , 徐秀林 , 朱根娣 , 王新华

膜科学与技术 doi:10.3969/j.issn.1007-8924.2008.06.016

以Fresenius F6聚砜膜复用透析器为研究对象,对其膜表面粘附的蛋白进行定量分析研究.用4种不同的化学清洗剂及超声波的方法,对膜表面粘附的蛋白进行清洗,以获得最佳清洗方法;对透析器不同部位膜上的蛋白进行测定,获得不同部位膜上蛋白含量的差异性;用双向电泳的方法检测膜上粘附的蛋白含量及其性质,获得不同种类蛋白与聚砜膜结合的特异性关系.结果显示:使用5次后每克纤维膜表面粘附的蛋白量至少为0.1 mg,且在透析器各部位分布不同;超声波是一种用来清洗膜上残留物质的有效方法;膜表面粘附的蛋白主要是中性或偏酸性的蛋白,中、大分子量的蛋白容易造成膜孔堵塞且不易去除,而小分子量的蛋白较易去除.

关键词: 复用透析器 , 粘附蛋白 , 超声波 , 双向电泳

蛋白质组学技术筛选与鉴定在甲基对硫磷胁迫下牙鲆脑组织表达的差异蛋白质

那宏坤 , 黄清育 , 陈盈盈 , 黄河清

色谱 doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2008.06.003

以甲基对硫磷(MP)为有机磷农药污染源,采用蛋白质组学技术分离及鉴定在甲基对硫磷胁迫下,牙鲆(Paralichthys olivaceus)脑组织表达的差异蛋白质,从中筛选出潜在的适合于监测甲基对硫磷污染程度的蛋白指示物.实验结果表明:在甲基对硫磷胁迫下,牙鲆脑组织表达出17个差异蛋白质,经肽质量指纹(PMF)图谱技术鉴定后,发现其中部分差异蛋白质为热休克蛋白、细胞色素P450和谷胱甘肽S-转移酶,均是与受甲基对硫磷胁迫有关的蛋白质.

关键词: 蛋白质组学 , 双向电泳 , 甲基对硫磷 , 蛋白指示物 , 牙鲆脑

适于双向电泳分析的苹果叶片蛋白质提取方法

曾广娟 , 李春敏 , 张新忠 , 滕云龙 , 董文轩

色谱 doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2009.04.021

为了探索适用于双向电泳(2-DE)分析的苹果叶片蛋白质提取方法,比较了三氯乙酸(TCA)/丙酮沉淀法、二硫苏糖醇(DTT)/丙酮法、Tris-HCl提取法和改良的Tris-HCl提取法等4种蛋白质提取方法.以7 cm、pH 3~10的线性固相pH梯度(immobilized pH gradient,IPG)胶条作为第一向电泳,以十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)(12.5%的分离胶)作为第二向电泳,对提取物进行2-DE分离,采用银染显色.结果表明,上述4种方法在2-DE图谱上分别得到140,215,181和616个蛋白质点.其中以改良的Tris-HCl提取法得到的蛋白质点数最多,且背景清晰、图谱上没有明显的横纵条纹.为了进一步验证改良的Tris-HCl提取法的有效性,用18 cm、pH 3~10的线性IPG胶条和12.5%的分离胶对提取的苹果叶片蛋白质进行2-DE分离,考马斯亮蓝R-250染色,共检测到455个蛋白质点,其相对分子质量主要分布在 14 000~66 000 范围内,图谱背景清晰,再次证明应用该方法制备的样品适用于双向电泳分析,可用于苹果叶片的蛋白质组学分析.

关键词: 双向电泳 , 蛋白质提取方法 , 苹果叶片 , 蛋白质组学分析

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