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改性后不同孔隙度多孔钛对成骨细胞的影响

陈良建 , 张思慧 , 李益民 , 崔晓明 , 郑遥 , 李挺

中国有色金属学报

采用碱热处理和仿生沉积HA对注射成形多孔钛进行表面处理,研究改性后多孔钛的细胞毒性及其成骨细胞黏附、增殖和分化的影响.结果表明:改性后多孔钛无细胞毒性,不同孔隙度多孔钛的细胞黏附形貌不同,复合培养7 d后,5%孔隙度组细胞平铺于材料表面,30%孔隙度组细胞多呈长梭形,60%孔隙度组MG63细胞伪足以锚状牢固附着于孔壁的颗粒之上,形成细胞桥;成骨细胞在高孔隙度组表面细胞的增殖数高于低孔隙度组表面细胞的;复合培养7 d与14 d,5%孔隙度组与30%孔隙度组的上清液中碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)含量无明显差别(p＜0.05),而60%孔隙度组的ALP含量高于低孔隙度组的.

关键词: 生物材料 , 医用钛合金 , 多孔钛 , 孔隙度 , 黏附 , 增殖 , 碱性磷酸酶

基于纳米抗体-碱性磷酸酶融合蛋白的一步酶联免疫吸附分析法检测黄曲霉毒素B₁

曹冬梅 , 许杨 , 涂追 , 李燕萍 , 熊亮 , 付金衡

分析化学 doi:10.11895/j.issn.0253-3820.150902

从噬菌体展示的抗黄曲霉毒素B₁(AFB₁)纳米抗体文库中,通过四轮亲和淘选,得到抗AFB₁纳米抗体G8。将编码纳米抗体G8的基因与碱性磷酸酶(AP)基因融合,构建了重组融合表达载体pET25b(+)-G8-AP,将其转化大肠杆菌BL21(Rosetta,DE3)感受态细胞,异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导融合基因表达。SDS-PAGE结果表明,融合蛋白G8-AP为可溶性表达,Ni²⁺-NTA亲和层析柱纯化融合蛋白,对硝基苯磷酸二钠(pNPP)法测得纯化后的G8-AP的碱性磷酸酶比活力为(364.5±8.3) U/mg。ELISA检测结果表明,G8-AP具有特异识别AFB₁的活性,与其它真菌毒素(AFB₂、AFG₁、AFG₂、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、玉米赤霉烯酮、伏马菌素B₁)无交叉反应。基于G8-AP建立了检测AFB₁的一步ELISA法。在优化的条件下,即甲醇浓度20%、盐离子浓度20 mmol/L、pH 7.4条件下,方法的半数抑制浓度(IC₅₀)为19.8 ng/mL,线性范围为4.3-92 ng/mL,检出限为2.6 ng/mL。对玉米和小麦样品加标回收实验结果表明,基质对本方法的干扰不明显,可用于实际样品检测。

关键词: 抗黄曲霉毒素B₁纳米抗体 , 碱性磷酸酶 , 融合表达 , 酶联免疫吸附分析

微柱液相色谱-电喷雾串联质谱检测多磷酸化肽位点

王晖 , 段继诚 , 袁辉明 , 张丽华 , 张维冰 , 张玉奎

色谱 doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2007.04.001

基于碱性磷酸酶的去磷酸化作用,发展了一种可改善多磷酸化肽电喷雾质谱检测效果的技术.将β-酪蛋白酶解产物用TiO2柱富集后,用碱性磷酸酶进行处理,并经微柱液相色谱分离后采用串联质谱进行鉴定.通过谱图中存在相对分子质量与根据氨基酸序列预计的单磷酸化肽相差80的色谱峰,可以证实样品中含有单磷酸化肽.此外,经碱性磷酸酶处理后的样品的色谱峰数目的增加,说明样品中可能存在多磷酸化肽段.通过控制去磷酸化反应的程度,使四磷酸化肽的部分磷酸基团被去除,从而可以推断其中3个磷酸化位点可能处于氨基酸残基序列的第17、18和19位.

关键词: 微柱液相色谱 , 电喷雾串联质谱 , 多磷酸化肽 , 磷酸化位点 , 碱性磷酸酶

生物玻璃矿化性能及其离子溶出对成骨细胞功能的影响

涂杰 , 王迎军 , 陈晓峰 , 欧阳钧 , 邱小忠

无机材料学报 doi:10.3321/j.issn:1000-324X.2007.01.025

通过体外矿化实验,对比研究了熔融法生物玻璃45S5和溶胶-凝胶法生物玻璃58S、77S的生物矿化性能的差异;并运用了这三种生物玻璃的DMEM(Dulbecco's Modified Eagle Medium)浸提液对MC-3T3细胞进行培养,以考察不同生物玻璃在培养液中的离子溶出对成骨细胞增殖及ALP(碱性磷酸酶)活性的影响.通过体外矿化实验可以发现,77S的生物矿化性能相对45S5和58S较差,在SBF溶液(模拟体液)中浸泡96h只能形成HA(羟基磷灰石)晶体,45S5和58S则能生成类骨HCA(碳酸羟基磷灰石)晶体;但细胞培养实验发现,77S浸提液中培养的细胞,其细胞增殖和ALP活性都明显高于45S、58S和对照组.由此认为,一定的离子浓度范围内,Si离子的存在有利于成骨细胞的增殖与分裂.

关键词: 生物玻璃 , 生物矿化性能 , 细胞增殖 , 碱性磷酸酶

氨烷基磷酸钠及其改性的羟基磷灰石对MG 63细胞功能的影响?

刘帅 , 孙富华 , 江依柔 , 谢兴益

功能材料 doi:10.3969/j.issn.1001-9731.2016.06.019

氨烷基磷酸钠(AAP-n-Na,n＝2~6,为氨烷基的碳原子数)可用于制备羟基磷灰石(HA)胶体,是新型的 HA表面改性剂,我们的前期研究已证实其无细胞毒性.进一步研究 APP-n-Na 及其改性 HA(Cn-HA)对成骨样细胞MG63功能的影响.研究结果表明,在0．1％浓度下,n＝3,4,5的APP-n-Na对MG63细胞的碱性磷酸酶(ALP)和骨钙素(OCP)的表达无不良影响,和阴性对照(空白培养基)的表达水平一致；所有 APP-n-Na对矿化结节的形成无不良影响.Cn-HA的浸提液(0．1 g/mL,以培养基为浸提介质)对 ALP 的表达和生物矿化均无不良影响,和对照样(未改性 HA和空白培养基)相比无显著差异.研究预示 APP-n-Na 及其改性的 HA 用于骨修复材料是安全的.

关键词: 氨烷基磷酸 , 羟基磷灰石 , 成骨细胞 , 碱性磷酸酶 , 骨钙素 , 钙化结节

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