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用MicroBCA方法定量检测硅烷化表面固定的纤维连接蛋白

周超 , 张慧婷 , 陈俊英 , 李遂焰 , 黄楠

功能材料

使用microBCA方法(micro-bicinchoninicacid protein assay),定量研究了人纤维连接蛋白(fi-bronectin,Fn)在硅烷化石英玻璃表面实现共价固定的情况。首先对石英玻璃进行化学清洗,使表面的羟基得以充分暴露。再利用硅烷偶联剂(APTE)将氨基基团引入,并通过EDC/NHS催化体系把人纤维连接蛋白以酰胺键的形式共价固定于该表面。最后用Mi-croBCA方法对该表面固定化的生物分子(Fn)进行量化表征。应用水接触角、X射线光电子能谱(X-rayphotoelectron spectroscopy,XPS)、原子力显微镜(atomic force microscope,AFM)等方法对各步处理效果进行跟踪分析。结果表明Fn在硅烷化石英玻璃表面实现了固定,一定范围内,硅烷化表面的Fn固定量随所使用Fn孵化液浓度的增加而增大。为生物材料表面改性与修饰研究中生物大分子的量化表征提供了一种新方法。

关键词: MicroBCA , 石英玻璃 , 纤维连接蛋白 , 定量检测

利用MicroBCA和QCM对钛薄膜表面固定纤连蛋白的量化研究与对比

张慧婷 , 周超 , 罗丽萍 , 李遂焰 , 陈俊英 , 孙鸿 , 黄楠

功能材料

采用物理化学稳定性较好的石英玻璃为基底,用非平衡磁控溅射技术于其表面沉积生物相容性良好的钛薄膜,然后在钛薄膜表面共价固定纤连蛋白。采用傅立叶红外光谱(FT—IR)和X射线光电子能谱(XPS)对各步处理后的材料表面特征进行检测和分析。主要研究了用MicroBCA检测法对样品表面固定的纤连蛋白的定量表征的可行性,并将该结果与用石英晶体微天平(QCM)方法检测获得的纤连蛋白量做了对比和深入分析。结果显示,纤连蛋白可以成功固定到钛薄膜表面,MicroBCA检测法和QCM法的检测结果具有一致性,样品表面纤连蛋白的固定量大约在767~789ng/cm2。

关键词: 钛薄膜 , 纤连蛋白 , MicroBCA , QCM , 定量

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