包慧敏
,
谢力琦
,
陆豪杰
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2016.09003
蛋白质糖基化是一种广泛存在的重要的蛋白质翻译后修饰,糖基化肽在总酶解肽中占的比例不超过5％,这使得糖肽的分离富集成为糖蛋白质组学研究发展的关键技术之一.在诸多糖蛋白质组富集技术中,化学方法是富集技术的主导,本文从化学反应的角度介绍糖基化蛋白质富集的技术进展.富集过程按照连接和释放分别讨论,在连接过程中,重点介绍硼酸化学法、肼化学法、胺化学法和肟点击法;在释放过程中,以N-糖蛋白的酶释放法和O-糖蛋白的β-消除法为主导,一并介绍了最新的氧化断裂释放的化学法.最后,讨论总体富集策略的发展现状.该文以糖蛋白富集的共价反应为核心,分析不同方法的优缺点以及各技术在糖蛋白质组学研究中的应用和贡献.
关键词:
糖蛋白质组
,
蛋白质糖基化
,
糖蛋白
,
富集
,
连接/释放
,
共价反应
,
综述
杨帆
,
毛劼
,
何锡文
,
陈朗星
,
张玉奎
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2013.04023
发展了以巯基-烯点击反应制备有机-无机杂化硼酸亲和整体柱的新方法.首先以四甲氧基硅烷(TMOS)和巯丙基三甲氧基硅烷(MPTMS)作为反应单体,采用溶胶-凝胶反应制备表面含巯基的硅胶整体柱.然后利用巯基-烯(thiol-ene)的点击反应在整体柱上修饰硼酸配基3-丙烯酰胺基苯硼酸(AAPBA),制成AAPBA-硅胶杂化亲和整体柱.对影响硼酸亲和整体柱性能的条件如TMOS与MPTMS的比例、聚乙二醇和甲醇的用量等进行了优化.并采用扫描电镜、红外光谱等分析仪器对整体柱形貌和机械稳定性能进行了表征.研究了AAPBA-硅胶杂化亲和整体柱的分离性能,结果表明,其在中性条件下对含有顺式二醇的生物小分子核苷具有良好的特异亲和能力,并已成功地应用于卵清蛋白、辣根过氧化物酶等糖蛋白的分离.基于巯基-烯反应的制备方法新颖、可靠,可用于制备多种不同类型的硼酸亲和整体柱,具有较大的应用前景.
关键词:
巯基-烯
,
点击化学
,
硼酸亲和整体柱
,
有机-无机杂化材料
,
糖蛋白
汪勇
,
高培峰
,
赵新颖
,
屈锋
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2013.03052
建立了毛细管电泳表征多肽和糖蛋白稳定性的方法.分别以血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)和植物血球凝集素(PHA)、牛凝血酶(B-Thr)、人凝血酶(H-Thr)、辣根过氧化物酶(HRP)4种糖蛋白为多肽和糖蛋白的模式分子.从样品浓度、电泳缓冲液、样品溶液pH和离子强度等方面优化了血管紧张素Ⅱ的分离分析条件;从毛细管的选择、样品的电荷状态、电泳缓冲液的选择和分离电压的影响等方面讨论了糖蛋白的分离条件.Ang Ⅱ和4种糖蛋白的稳定性试验结果表明:Ang Ⅱ可在pH 7.4的硼酸盐缓冲液(0.02 mol/L)中于4℃下稳定放置48 h;4种糖蛋白可在pH 7.4硼酸盐缓冲液(0.2 mol/L)中于20,4,-20℃下稳定放置48 h;放置时间大于一周且小于四周时,在-20℃下各蛋白质均保持稳定;放置时间大于两周且小于四周时,只有HRP在上述3个温度下均保持稳定.该方法具有高效、快速、简单、低成本的特点,可广泛应用于多肽和蛋白质的稳定性表征.
关键词:
毛细管电泳
,
多肽
,
糖蛋白
,
稳定性
时照梅
,
范超
,
黄俊杰
,
白海红
,
秦伟捷
,
蔡耘
,
钱小红
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2014.09037
生物体内蛋白质的糖基化修饰调控着细胞识别、细胞黏附和迁移以及免疫应答等多种生理过程,并与多种人类重大疾病的发生、发展密切相关.因此对蛋白质糖基化修饰的鉴定,不仅能够为生物学机理研究提供重要信息,对疾病诊断标志物和治疗靶标的发现也至关重要.然而在复杂生物体系中,大多数糖蛋白为低丰度蛋白质,其含量与现有质谱仪器的检测灵敏度之间存在较大差距,所以对含有不同糖型结构的糖蛋白进行全面/高效的富集,是实现高灵敏度糖蛋白鉴定的必由之路.凝集素富集作为一种有效的糖蛋白富集方法,已在糖蛋白质组学研究中得到了广泛的应用.针对现有凝集素功能化材料存在负载量偏低以及富集效率有限等问题,我们制备了两种以氧化石墨烯(GO)为载体的新型固定化凝集素,利用GO比表面积大,功能基团含量高,分散性、化学稳定性好等特点,实现了高负载量的凝集素固定(GO-ConA 2.073 mg/mg,RSD=1.0％;GO-WGA 1.908 mg/mg,RSD=0.14％).同时考察了材料的可重复使用性与稳定性:每隔3天测一次同一GO-lectin材料对对应糖蛋白的富集效果,可以看出材料合成两周内富集效果都＞200 μg/mg.将该GO-lectin成功应用于糖蛋白、糖肽的选择性富集,在糖蛋白质组学研究中体现出良好的应用潜力.
关键词:
凝集素
,
氧化石墨烯
,
富集
,
糖蛋白
,
糖肽
孙凯博
,
尚志
,
孙妍
,
乔智
,
刘莎
,
樊柳荫
,
曹成喜
,
肖华
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2016.08038
唾液中的糖蛋白丰度偏低,给分离、分析带来挑战.该文采用麦胚素(WGA)和橙黄网胞盘菌凝集素(AAL)分别富集糖蛋白,考察了高丰度蛋白质去除和不同酶解方式对糖蛋白分离、分析的影响.结果显示,WGA和AAL提取的唾液糖蛋白经胶内酶解可鉴定到的糖蛋白数量显著多于溶液内酶解的结果,也优于去除高丰度蛋白质后的鉴定结果.选择WGA结合胶内酶解进一步对比分析肺癌患者与健康人唾液糖蛋白的差异,通过免标记定量分析共鉴定到139个蛋白质,其中102个蛋白质存在糖基化位点,包括14个在癌症组和正常组之间存在显著差异(p＜0.05)的糖蛋白,表明该策略可用于唾液糖蛋白的有效分离、分析和癌症标志物的发现.
关键词:
凝集素
,
糖蛋白
,
唾液
,
标志物
