郝颖
,
王荣
,
尹强
,
谢华
,
李文斌
,
贾正平
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2013.04045
胃癌是临床常见的恶性肿瘤之一.近年来寻找肿瘤相关特异蛋白质是蛋白质组学研究的热点.本文通过考察毛细管动态涂层方法、筛分介质聚环氧乙烷(PEO)的浓度、缓冲液的pH值、分离电压、温度及荧光染料对分离效果的影响,建立了毛细管电泳-激光诱导荧光法分离胃癌组织及癌旁正常组织蛋白质的方法；通过分离检测,获得两者的蛋白质指纹图谱.经分析,两者的指纹图谱相似度达到0.8以上,差异蛋白质分子质量集中在50 000 ～100 000 Da之间,提示某些小分子蛋白质可能是和肿瘤发生相关的特异蛋白质,从而缩小了特异性分子标记物的筛选范围.病理组织学分型及蛋白质电泳峰数目的统计结果验证了该方法的可靠性.该方法具有临床应用的潜力.
关键词:
毛细管电泳
,
激光诱导荧光检测
,
蛋白质
,
差异性
,
胃癌组织
,
癌旁正常组织
张倩倩
,
张雪佩
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张含智
,
康经武
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2013.04032
发展了一种基于毛细管电泳(CE)-激光诱导荧光(LIF)检测的多个细胞内源激酶的抑制剂平行筛选及选择性评价方法.CE高效的分离能力和LIF检测器的高选择性,使得同时测试多个胞内激酶的活性成为可能.共4种细胞系、3种特异性蛋白激酶底物肽、2种选择性蛋白激酶抑制剂和1种非选择性蛋白激酶抑制剂用于方法的建立.特异性底物肽与细胞裂解液混合后孵育,被其相应的激酶选择性地磷酸化,利用CE-LIF分离检测磷酸化产物和底物肽.同时测定一个抑制剂对几种蛋白激酶的抑制活性,用于评价抑制剂的选择性.与传统的单靶标筛选模式相比,这种基于细胞裂解液的多靶标筛选方法能提供更多的信息,更加高效,且细胞裂解液作为一种廉价的激酶来源大大降低了筛选成本.
关键词:
毛细管电泳
,
激光诱导荧光检测
,
蛋白激酶抑制剂筛选
,
选择性评价
