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用新型尼龙亲和膜纯化人血浆蛋白

甘宏宇 , 商振华 , 秦国平 , 刘学良 , 王俊德

色谱 doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2001.03.004

以微孔尼龙膜为基质,分别采用三氯三嗪和1,4-丁二醇二甘油醚活化法制备了一系列亲和膜.首次使用平板亲和膜方法经一步操作即从人血浆中纯化得到高纯度的γ-球蛋白、纤溶酶原.电泳分析显示,纯化得到的人血浆γ-球蛋白,纯度在83%以上;纯化得到的γ-球蛋白和纤溶酶原的纯度均高于市售同类产品;另外,初步探索了人血浆凝血酶的一步纯化法.该法纯化得到的凝血酶比活为42.0 NIH单位/mg~42.5 NIH单位/mg.

关键词: 亲和膜色谱 , 尼龙膜 , 人血浆 , 纯化 , γ-球蛋白 , 纤溶酶原 , 凝血酶

丝氨酸配基PVDF亲和膜脱除人血浆中内毒素的研究

徐堃 , 黄曼 , 吴礼光 , 徐秋萍 , 张林 , 陈欢林

膜科学与技术 doi:10.3969/j.issn.1007-8924.2011.02.006

以L-丝氨酸(Ser)为配基,1,6-己二胺为间隔臂,制备了一种新型PVDF中空纤维亲和膜用于人血浆中内毒素的脱除.通过FTIR、XPS对PVDF中空纤维膜,亲水化改性膜以及亲和膜的结构进行了表征;探讨了离子强度、pH值对亲和膜吸附内毒素能力的影响以及内毒素分子在亲和膜上的吸附动力学.实验考察了自制的亲和膜组件用于人血浆中内毒素的脱除效果.结果表明,亲和膜对内毒素的吸附能力为0.058 EU/cm2;自制的亲和膜组件对内毒素含量为0.42 EU/mL的人血浆样品清除率为43.8%;亲和膜对人血浆样品的其它生化指标的影响不大.

关键词: 内毒素 , 亲和膜 , PVDF , 丝氨酸 , 人血浆

高效液相色谱法测定人血浆中的芦氟沙星

张先洲 , 潘细贵 , 罗顺德 , 罗卡 , 申献玲

色谱 doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2000.02.025

建立了测定人血浆中芦氟沙星质量浓度的高效液相色谱法,血浆用二氯甲烷提取3次,以Ultrasphere ODS (4.6 mm I.d.×250 mm)为色谱柱,流动相为甲醇-10 mmol/L溴化四丁铵-三乙胺(体积比为32:68:0.5),用磷酸调pH 2.8,检测波长295 nm,流速为1.2 mL/min,以培氟沙星为内标.血浆中芦氟沙星的线性范围为0.1~10 mg/L,最低检测质量浓度为0.05 mg/L,回收率为99.7%,日内、日间RSD分别为 2.33%和3.83%.方法简便、快速、准确,适用于人血浆中芦氟沙星质量浓度的测定.

关键词: 高效液相色谱法 , 芦氟沙星 , 培氟沙星 , 人血浆

微乳液相色谱法测定人血浆中的丙泊酚

张婷 , 崔颖

色谱 doi:10.3724/SP.J.1123.2011.00768

建立了基于微乳液相色谱( MELC)的人血浆中丙泊酚浓度的测定方法.采用Hypersil BDS C18色谱柱分离,并考察了微乳流动相中各组分对溶质洗脱的影响.优化的色谱条件:以0.5%醋酸(含有3.0%十二烷基硫酸钠(SDS),0.8%正庚烷,6.0%正丁醇)微乳为流动相,流速为1.0 mL/min,荧光检测器激发波长(λex)为274 nm、发射波长(λem)为312 nm,柱温为室温.人血浆样品用流动相稀释并离心后,直接进样分析.丙泊酚在0.25 ~ 10μg/mL质量浓度范围内呈良好的线性关系,方法的回收率为(98.2±1.9)%~(104.6±2.2)%;日内测定峰面积的相对标准偏差(RSD)为1.42%~2.43%,日间测定峰面积的RSD为2.75%~4.79%.该方法简便可行、重复性好,可用于人血浆中丙泊酚浓度的测定.

关键词: 微乳液相色谱 , 荧光检测 , 丙泊酚 , 人血浆

金纳米粒子富集-高效液相色谱同时测定人血浆中三种氨基硫醇

蒙芳 , 刘承伟 , 陈敏 , 卢昕 , 赵书林

色谱 doi:10.3724/SP.J.1123.2012.05011

建立了金纳米粒子富集-高效液相色谱-紫外检测( HPLC-UVD)同时测定人血浆中3种氨基硫醇(半胱氨酸( Cys)、高半胱氨酸(Hcys)、谷胱甘肽(GSH))的新方法.以Tween 20修饰的金纳米粒子作为选择探针萃取富集氨基硫醇.经二硫苏糖醇脱附后,采用SpursilTMC18柱(250 mm×4.6 mm,5μm)分离氨基硫醇,以60 mmol/L磷酸盐缓冲溶液(pH 2.0)等度洗脱,检测波长为200 nm.3种氨基硫醇的浓度分别在0.025 ~ 350 μmol/L、0.02 ~ 60μmol/L、0.01~ 50 μmol/L内与峰面积具有良好的线性关系,相关系数均高于0.99.方法检出限(信噪比为3)分别为5.0、6.0和2.5 nmol/L,回收率为92.8% ~ 106.0%.该方法能显著降低血浆样品中内源性物质的干扰,提高HPLC-UVD的选择性和灵敏度.将该方法应用于心血管病人血浆中上述氨基硫醇的分离测定,结果显示:与对照组相比,疾病组血浆中的Hcys和GSH水平存在显著性差异,Cys不存在显著性差异.

关键词: 高效液相色谱 , 紫外检测 , 金纳米粒子 , 富集 , 氨基硫醇 , 人血浆

液相色谱-串联质谱法检测人血浆及脂蛋白唾液酸的含量

郭守东 , 桑慧 , 杨娜娜 , 阚玉杰 , 李富裕 , 李煜 , 李方圆 , 秦树存

色谱 doi:10.3724/SP.J.1123.2014.07002

建立了液相色谱-串联质谱(LC-MS / MS)检测人血浆脂蛋白唾液酸的方法,并比较了糖尿病患者与健康人血浆脂蛋白唾液酸的差异。采用 pH =2的醋酸水解唾液酸,高速离心后采用优化的条件进行 LC-MS / MS 分析。结果表明:在负离子模式下,唾液酸的检出限和定量限分别为7.4和24.5 pg。唾液酸在2.5~80 ng / mL 范围内呈良好的线性关系,相关系数 R2大于0.998。糖尿病患者(平均年龄51.6岁)和健康人(平均年龄50.7岁)血浆中唾液酸的含量分别为(548.3±88.9)和(415.3±55.5)mg / L;两组实验人群中极低密度脂蛋白、低密度脂蛋白和高密度脂蛋白唾液酸的含量分别为(4.91±0.19)、(6.95±0.28)、(3.61±0.22)μg / mg和(2.90±0.27)、(7.03±0.04)、(2.40±0.09)μg / mg。糖尿病患者极低密度脂蛋白和高密度脂蛋白唾液酸含量显著高于同龄健康人水平( P<0.01)。该法可快速检测血浆中脂蛋白唾液酸含量,省时省力。

关键词: 液相色谱-串联质谱 , 唾液酸 , 脂蛋白 , 人血浆 , 糖尿病

固相萃取-高效液相色谱法测定人血浆中的川芎嗪

翁伟宇 , 沈腾 , 徐惠南 , 张建芳 , 黄建明 , 黄照昌 , 蔡佳

色谱 doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2005.03.016

建立了高效液相色谱测定人血浆中川芎嗪浓度的方法.色谱条件:分析柱为Luna C18(150 mm×4.6 mm i.d.,5 μm),流动相为甲醇-乙腈-醋酸盐缓冲液(pH 5.0)(体积比为50∶8∶42),流速1.0 mL/min,柱温40 ℃,检测波长280 nm.血浆样品预处理采用C8固相小柱萃取法.方法的线性范围为25~5000 μg/L,线性相关系数为0.9999.高、中、低浓度的川芎嗪在标准血浆样品中的平均提取回收率为96.72% ~100.90% ,日内和日间相对标准偏差(RSD)小于8.64% ,准确度为99.59% ~103.26% ,检测限为10 μg/L.该方法的各项效能指标符合生物样品的分析要求,可用于川芎嗪制剂的人体药代动力学研究.

关键词: 反相高效液相色谱法 , 川芎嗪 , 人血浆

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