吴鹏
,
杨晓燕
,
边六交
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2004.01.001
为了能从中华眼镜蛇蛇毒中简单快速地分离纯化神经生长因子(一种治疗各种神经性损伤和神经退行疾病的药物,简称NGF),采用不同的色谱柱联用的方式对NGF的纯化工艺进行了研究.结果表明,采用DEAE-Sepharose F.F.和Sephadex G-50二步柱色谱工艺可以从蛇毒中快速分离得到神经生长因子.经十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳和反相高效液相色谱分析, 证明所得到的NGF为单一组分,相对分子质量约为29 000.对8 d龄鸡胚背根神经节采用体外培养法,结果证明,所得NGF具有明显的促进神经纤维生长的生物活性.
关键词:
阴离子交换色谱
,
凝胶排阻色谱
,
神经生长因子
,
中华眼镜蛇蛇毒
,
分离
,
纯化
卢素格
,
沈金灿
,
庄峙厦
,
王小如
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2005.02.010
建立了金属硫蛋白(MT)异构体及亚型异构体的色谱分离与质谱鉴别方法.将金属硫蛋白混合物通过弱阴离子DEAE Sephadex A-25离子交换柱,结合离线电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)对锌诱导金属硫蛋白的两个异构体MT-1和MT-2进行分离和检测;利用Sephadex G-25凝胶排阻色谱柱对得到的两个金属硫蛋白异构体进行脱盐;探索脱盐后的金属硫蛋白异构体在不同色谱条件下的C18反相色谱柱上的保留行为,进而实现各个亚型异构体的分离;通过在线电喷雾质谱检测实现了对金属硫蛋白各个亚型异构体的鉴别.结果表明,通过优化色谱条件,由离子交换色谱及凝胶排阻色谱得到的金属硫蛋白各亚型异构体在酸性条件下均得到了良好的分离,质谱检测结果与前人的文献报道结果一致.该方法可使金属硫蛋白各异构体均达到最佳的分离效果.
关键词:
离子交换色谱
,
凝胶排阻色谱
,
反相高效液相色谱
,
金属硫蛋白
,
异构体
周勃
,
边六交
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2008.03.025
为了从猪血中分离纯化高纯度的猪血红蛋白,建立了通过超滤、DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换色谱和Sephadex G-75凝胶排阻色谱三步法制备高纯度猪血红蛋白的方法,并通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、高效凝胶排阻色谱和反相高效液相色谱方法,对纯化后的猪血红蛋白进行了鉴定.经三步分离纯化后,猪血红蛋白的纯度大于99% ,含量为1.328 g/L.
关键词:
超滤
,
阴离子交换色谱
,
凝胶排阻色谱
,
猪血红蛋白
,
分离
,
纯化
马丽娜
,
吴丹
,
边六交
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2012.03022
Kringle 5是血纤维蛋白溶酶原中特异抑制内皮细胞增生和迁移活性最高的一种血管生成抑制剂.该实验在前期成功克隆和表达可溶性非融合血管生成抑制剂Kringle 5的基础上,建立了一种两步色谱法分离纯化Kringle5的方法.首先用SP Sepharose Fast Flow强阳离子交换色谱柱对Kringle 5重组菌体破碎上清液进行初步分离,然后再用丙烯葡聚糖凝胶S-100 HR凝胶排阻色谱柱对其进行进一步的纯化.采用本方法得到的可溶性非融合血管生成抑制剂Kringle 5经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和高效凝胶排阻色谱检测其纯度大于98％,通过鸡胚尿囊膜法确定这种蛋白质具有抑制内皮毛细血管生长的活性.
关键词:
阳离子交换色谱
,
凝胶排阻色谱
,
血管生长抑制剂Kringle 5
,
分离
,
纯化
侯清华
,
宋淑亮
,
梁浩
,
王伟莉
,
吉爱国
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2012.10004
增强型绿色荧光蛋白(EGFP)是生物领域常用的标记物.在前期成功克隆表达EGFP的基础上,本实验建立了两步分离纯化EGFP的色谱方法,并验证其分离纯化效果,检验EGFP的活性.首先用金属螯合亲和色谱柱HisTrap HP对EGFP的重组菌体破碎上清液进行初步分离,再用葡聚糖凝胶排阻色谱柱Sephadex G-10 HR对其进行脱盐纯化.采用丙烯葡聚糖凝胶排阻色谱柱Sephacryl S-300 HR和十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测分离纯化后的EGFP纯度.最后通过荧光分光检测器和非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(NativePAGE)验证分离纯化后的EGFP是否具有荧光活性.结果表明该方法可以简便快速地分离纯化EGFP,纯度超过98％,同时保持了EGFP的荧光活性.
关键词:
金属螯合亲和色谱
,
凝胶排阻色谱
,
增强型绿色荧光蛋白
,
分离
,
纯化
