甘宏宇
,
商振华
,
秦国平
,
刘学良
,
王俊德
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2001.03.004
以微孔尼龙膜为基质,分别采用三氯三嗪和1,4-丁二醇二甘油醚活化法制备了一系列亲和膜.首次使用平板亲和膜方法经一步操作即从人血浆中纯化得到高纯度的γ-球蛋白、纤溶酶原.电泳分析显示,纯化得到的人血浆γ-球蛋白,纯度在83%以上;纯化得到的γ-球蛋白和纤溶酶原的纯度均高于市售同类产品;另外,初步探索了人血浆凝血酶的一步纯化法.该法纯化得到的凝血酶比活为42.0 NIH单位/mg～42.5 NIH单位/mg.
关键词:
亲和膜色谱
,
尼龙膜
,
人血浆
,
纯化
,
γ-球蛋白
,
纤溶酶原
,
凝血酶
张月侠
,
宋茂勇
,
李涛
,
赛道建
,
汪海林
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2009.03.016
以一种高亲和力适配体作为亲和荧光探针,以自建的毛细管电泳-激光诱导荧光(CE-LIF)检测装置为基础,建立了一种高灵敏、快速测定人凝血酶的方法.荧光标记的凝血酶适配体特异性地与凝血酶结合并形成稳定的凝血酶-适配体复合物,采用CE-LIF对复合物进行分离检测,从而测定凝血酶浓度.探讨了盐离子种类及浓度对适配体与凝血酶结合的影响,并在选定的电泳条件下对凝血酶检测的线性范围、检出限和重现性进行了测定.结果表明,盐离子存在的条件下适配体与凝血酶的亲和力降低,不利于两者的结合;人血清溶液中,凝血酶浓度在0.25～10 nmol/L 范围内与复合物峰面积具有良好的线性相关性(r2=0.991),检出限(S/N=3)为55.6 pmol/L;精密度和回收率测定结果均能满足分析的要求.
关键词:
亲和毛细管电泳
,
激光诱导荧光检测
,
凝血酶
,
适配体
,
血清
杨绍明
,
查文玲
,
孙清
,
李红
,
李瑞琴
,
尚培玲
应用化学
doi:10.3724/SP.J.1095.2014.30416
在玻碳电极(GCE)表面首先用增敏作用的多壁碳纳米管(MWCNTs)夹心于两层电沉积的铁氰化镍(NiHCF)氧化还原电化学探针之间,然后以金纳米粒子为固定核酸适配体的载体,构建了检测凝血酶的非标记型核酸适配体生物传感器.利用扫描电子显微镜(SEM)对MWCNTs和NiHCF的形貌进行了表征.利用电化学阻抗谱对传感器的组装过程进行了监测,用循环伏安法(CV)和差分脉冲伏安法(DPV)对传感器的电化学行为进行了研究.以铁氰化镍为探针的传感器对凝血酶的检测在1.0 ng/L～1.0 mg/L范围内呈良好的线性关系,相关系数为0.998,检测限为0.2 ng/L(S/N=3).
关键词:
铁氰化镍
,
核酸适配体
,
凝血酶
,
传感器
王雄飞
,
张玉杰
,
叶静
,
罗志强
,
詹雪艳
,
袁瑞娟
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2013.01024
对凝血酶-琼脂糖亲和色谱介质的制备方法进行了研究.首先使用凝血酶和溴化氰活化的琼脂糖制备凝血酶-琼脂糖亲和色谱介质,然后用生色底物法考察亲和色谱介质上凝血酶的活性,以凝血酶活性为指标对最佳偶联条件进行了优化.结果表明最佳条件为使用pH8.3的Na2CO,-NaHCO,溶液(含0.5 mol/L NaCl)为缓冲溶液,凝血酶用量为每1 g色谱介质加入凝血酶200 U,室温反应10 h.在最佳条件下所制备的色谱介质有较好的稳定性,在4℃条件下存放40天,亲和介质上的凝血酶活性仍有70.6％保留.该亲和色谱介质可广泛用于含凝血酶抑制剂的天然药物筛选和分离纯化.
关键词:
凝血酶
,
亲和色谱
,
生色底物法
