许静静
,
刘幸
,
周虎
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2016.08047
蛋白质翻译后修饰(PTMs)是调节细胞内生理活动的重要途径.该文总结了近年来PTMs蛋白质组学相关的分离方法,包括反相(RP)色谱法、离子交换(IEX)色谱法、亲水相互作用色谱(HILIC)法、多孔石墨化碳(PGC)色谱法、毛细管电泳(CE)法及分子筛色谱(SEC)法等.这些新方法为磷酸化、乙酰化、糖基化等PTM肽段或蛋白质的鉴定提供了更高的分离度和灵敏度.此外,该文也介绍了蛋白质领域其他重要分离方法的研究进展,这些方法可能被进一步应用于PTMs蛋白质组学的研究中.
关键词:
翻译后修饰
,
蛋白质组学
,
反相色谱
,
离子交换色谱
,
亲水相互作用色谱
,
多孔石墨化碳色谱
,
毛细管电泳
赵良娟
,
邹娟娟
,
王秀丽
,
阎超
,
高如瑜
,
刘明羽
,
吕宪禹
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2005.06.022
以1.5 μm无孔硅胶颗粒(non-porous silica,NPS)为固定相,采用电压和压力联合驱动流动相,用反相梯度加压毛细管电色谱(p-CEC)在7.5 min内实现了核糖核酸酶A、细胞色素C、溶菌酶和肌红蛋白等4种蛋白质的快速、高效的分离.比较了梯度加压毛细管电色谱和微柱液相色谱(μ-HPLC)分离蛋白质的结果,同时考察了固定相、离子对试剂三氟醋酸(TFA)浓度和电压等条件对梯度加压毛细管电色谱分离蛋白质的影响.结果表明,梯度p-CEC可以通过调节电压精细调节带电溶质的保留,提高分离选择性,缩短分离时间,得到较高的柱效.该方法在蛋白质分离分析及蛋白质组学的研究中具有很大的应用潜力,为高效快速地分离蛋白质开辟了新的途径.
关键词:
梯度洗脱
,
加压毛细管电色谱
,
反相色谱
,
蛋白质
韩小茜
,
魏燕
,
刘艳华
,
常静
,
仇伟
,
陈峰
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2008.05.021
在纤维索-三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)(CDMPC)手性固定相上,分别采用正相、反相及极性有机相色谱模式对氟环唑外消旋体进行了拆分,并考察了流动相组成在手性识别中对手性分离的影响.氟环唑在ChiralcelOD-H手性色谱柱(填充CDMPC手性固定相)上采用反相色谱模式,以甲醇-水(体积比为80:20)为流动相,获得了最佳的拆分,其两对对映异构体的分离度Rs分别为1.64和6.50.
关键词:
纤维素-三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)手性固定相
,
正相色谱
,
反相色谱
,
极性有机相色谱
,
对映异构体分离
,
氟环唑外消旋体
马成
,
潘一廷
,
张琪
,
王继峰
,
钱小红
,
应万涛
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2013.05043
蛋白质的N-糖基化是最重要的翻译后修饰之一,许多已知的血浆肿瘤诊断标志物及治疗靶标都是N-糖基化蛋白.针对血浆的糖蛋白质组研究有利于发现新的蛋白标志物.然而,血浆蛋白质浓度分布的动态范围非常宽,且同一位点上的糖链存在微观不均一性,影响了血浆中糖蛋白的鉴定效率.本文利用亲水材料ZIC-HILIC制备亲水富集柱分别对人血浆中的N-糖链和N-糖肽进行富集,并结合碱性反相色谱进行肽段的预分离和高准确度质谱分析,最终在健康人的血浆中鉴定到了299个糖基化蛋白、637个糖基化位点,并识别出31种不同的糖型.在这些鉴定到的糖基化位点中,新发现有107个N-糖基化位点(占总位点数的16.8％).本方法操作简单,可以有效富集N-糖肽和N-糖,为在血浆中寻找糖蛋白和糖链生物标志物提供了可靠的手段.
关键词:
超滤辅助样品制备
,
亲水相互作用色谱
,
反相色谱
,
N-糖基化蛋白
,
N-糖
钟虹敏
,
张华
,
万慧慧
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2012.11032
硅胶是目前高效液相色谱(HPLC)固定相中应用最为广泛的基质材料,其流动相的最佳使用范围为pH 2～8.在高pH(pH ＞8)的流动相条件下,流动相中的氢氧根会进攻硅胶基质表面残余的硅醇基,导致硅胶基质固定相骨架溶解.在前期的研究中,我们将高温氨气处理多孔硅胶微球得到的氮氧化硅材料用作HPLC固定相,氮氧化硅在高pH流动相条件下表现出了较硅胶更高的稳定性.本文利用元素分析对氮氧化硅材料的氮化程度及含氮量进行系统的表征,并考察了氮氧化硅材料在不同pH条件下的静态稳定性.利用十八烷基二甲基氯硅烷试剂对氮氧化硅材料表面进行疏水性修饰,并以元素分析和核磁共振波谱对表面键合氮氧化硅材料进行了表征.考察了不同碳链的烷基苯、酸性化合物、碱性化合物在疏水改性的C18氮氧化硅反相色谱固定相上的色谱分离性能.进一步分别以酸、碱和中性化合物为分析对象,比较了C18-SiON1050(10)与C18-SiO2色谱保留的差异.
关键词:
硅胶
,
氮氧化硅
,
元素分析
,
液相色谱固定相
,
反相色谱
邢倩倩
,
傅青
,
金郁
,
梁鑫淼
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2014.03027
建立了亲水/反相二维色谱用于制备桔梗中三萜皂苷单体的方法。桔梗经水煮醇沉、反相和亲水两种模式的固相萃取后得到三萜皂苷类组分。选定 XAmide色谱柱（150 mm×20 mm，5μm），以乙腈和水为流动相，在亲水色谱模式下进行组分制备。选择时间触发模式，以1 min为单位进行馏分收集，得到6~25 min 之间的20个三萜皂苷精细组分。以第18个馏分（JG23）为例，在反相色谱模式下采用 Atlantis Prep T3色谱柱（100 mm×30 mm，5μm）制备，得到两个单体化合物。通过质谱和核磁共振对其进行定性，确定分别为deapi-platycoside E和platyco-side E。实验结果表明，该制备方法具有好的正交选择性，对于复杂样品中三萜皂苷类化合物的分离纯化有一定的借鉴意义。
关键词:
反相色谱
,
亲水色谱
,
三萜皂苷
,
桔梗
,
制备
施文君
,
田华君
,
薛芸
,
翁中亚
,
瞿其曙
,
王彦
,
阎超
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2015.12039
研究制备了1.2μm放射型核壳色谱填料，并对其表面进行了键合 C18的改性，通过匀浆填充法制备了总长度为350 mm（固定相有效填充长度为70 mm）、内径为100μm的毛细管色谱柱，应用加压毛细管电色谱（ pCEC）法考察了硫脲和萘在该色谱柱上的分离性能，同时讨论了流动相中有机相的比例、缓冲液的浓度、pH 值、线性流速及施加电压对分离度的影响。实验结果表明，该新型核壳色谱填料在乙腈水体系中分离硫脲和萘时，表现出典型的反相色谱性能，当含有10 mmol／L磷酸的70％（ v／v）乙腈水溶液为流动相、缓冲液 pH 为7.2、施加电压为-10 kV时，柱效最高；在最佳线性流速为1 mm／s时，能够在8 min内实现8种中性物质的基线分离，且峰形较好，其中二苯甲酮的柱效高达19072块／m。该研究表明1.2μm新型放射型核壳色谱填料适用于 pCEC法的分离分析。
关键词:
加压毛细管电色谱
,
1.2 μm放射型核壳色谱填料
,
反相色谱
