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担载不同结构胺基的P(GMA-EDGMA)大孔载体的固定化酶活

厉向杰 , 张宝亮 , 贾佳 , 张秋禹

高分子材料科学与工程

设计并制备了一种树枝状超支化胺(DHA-NH2),并用红外光谱(IR)、核磁共振谱(NMR)对其结构和性能进行了研究.利用DHA-NH2、乙二胺、己二胺、二乙烯三胺分别修饰P(GMA-EDGMA)树脂,制备得到4种表面带有不同胺基结构的固定化酶载体,以木瓜蛋白酶为被固定酶模型,研究表面胺基结构与固定化酶活之间的构效关系.结果表明,在胺基含量基本相同的条件下,载体固定化酶活顺序为二乙烯三胺>己二胺>乙二胺> DHA-NH2;活性链段数目、活性链段官能团密度以及活性链段长度共同决定固定化酶的酶活,且增加活性链段数目、增大活性链段官能团密度以及增长活性链段长度均能在一定程度上提高固定化酶活.

关键词: 胺基修饰 , 大孔树脂 , 固定化酶 , 木瓜蛋白酶 , 酶活性

渗透膜结晶法结晶木瓜蛋白酶

张新妙 , 左俊芳 , 魏可贵 , 马润宇

膜科学与技术 doi:10.3969/j.issn.1007-8924.2008.05.019

用中空纤维微孔疏水膜进行木瓜蛋白酶的渗透膜结晶,研究温度和不同pH的缓冲溶液对木瓜蛋白酶静态渗透膜结晶的影响,优化木瓜蛋白酶渗透膜结晶的结晶条件.通过监控结晶溶液中木瓜蛋白酶浓度随时间的变化,考察沉淀剂和添加剂对结晶过程的影响,并对晶体进行尺寸分布分析.结果表明,对于木瓜蛋白酶的渗透膜结晶,在15~32℃下,以pH 4.7的乙酸盐为缓冲溶液,在沉淀剂(硫酸铵和磷酸钠)质量分数4%时,制备出质量较好的木瓜蛋白酶晶体.添加剂PEG600和PEG4000的加入提高了溶剂跨膜通量,改善了晶体质量.

关键词: 膜结晶 , 木瓜蛋白酶 , 疏水膜 , 结晶条件

尼龙亲和膜的制备条件优化及其表征

聂华丽 , 陈天翔 , 朱利民

膜科学与技术 doi:10.3969/j.issn.1007-8924.2011.02.014

尼龙膜经稀盐酸水解、壳聚糖改性后,以木瓜蛋白酶为亲和膜的配基,通过戊二醛的活化处理后采用共价结合的方法将配基键合在尼龙膜上,从而得到有特异吸附性能的尼龙亲和膜.本实验考察了制备尼龙亲和膜的交联剂戊二醛的质量分数、pH值、温度、反应时间和酶用量对亲和膜上木瓜蛋白酶活力的影响,确定了最适合的制备条件:pH=9.0,质量分数为0.5%的戊二醛,反应温度为45℃,反应时间为6 h,酶用量为10 mg/mL.该优化条件下制备的尼龙亲和膜具备优良的色谱性能,可用于分离纯化半胱氨酸蛋白酶抑制剂.

关键词: 亲和膜色谱 , 壳聚糖 , 木瓜蛋白酶 , 半胱氨酸蛋白酶抑制剂

木质素及其衍生物对酶的吸附

张夏红 , 程贤甦 , 丁马太

功能材料

研究了高沸醇木质素、高沸醇木质素酚、高沸醇木质素胺和木质素树脂对菠萝蛋白酶和木瓜蛋白酶的吸附性能,结果表明:这几种木质素类吸附剂都可以吸附菠萝蛋白酶和木瓜蛋白酶;经改性的高沸醇木质素胺和高沸醇木质素酚的吸附性能优于高沸醇木质素和木质素树脂,且吸附后的酶还能保持较高的活性,高沸醇木质素衍生物有望成为菠萝蛋白酶和木瓜蛋白酶的浓缩吸附剂或固定化的载体.

关键词: 木质素 , 吸附剂 , 木瓜蛋白酶 , 菠萝蛋白酶 , 吸附

尼龙亲和膜的制备及其对木瓜蛋白酶的分离纯化研究

聂华丽 , 陈天翔 , 朱利民

膜科学与技术 doi:10.3969/j.issn.1007-8924.2008.01.004

以尼龙膜为基质,键合壳聚糖的方法对尼龙膜进行改性,使膜的非特异性吸附大大降低,并偶联活性染料亲和基 Cibacron Blue F3GA,得到一种新的染料亲和膜.该亲和膜具有良好的色谱性能,对木瓜蛋白酶有较高的吸附量(235.3mg/g),吸附行为满足 Freundlich 吸附模型,pH值和离子强度对吸附量有明显影响.使用该亲和膜对木瓜粉中的木瓜蛋白酶进行分离纯化,纯化倍数可达46.5倍.

关键词: 活性蓝cibacron blue 3GA , 木瓜蛋白酶 , 亲和膜色谱 , 壳聚糖

大孔树脂固定木瓜蛋白酶的研究

贾佳 , 尹德忠 , 张宝亮 , 张和鹏 , 张昊天 , 厉向杰

材料导报

以环氧和氨基化的大孔树脂为载体,戊二醛为交联剂对木瓜蛋白酶进行了固定化,研究了不同载体和固定化条件对酶固定化率和相对活性的影响,考察了不同温度和pH值下游离酶和固定化酶的稳定性.实验结果表明,当给酶量为40 mg,固定化温度为77℃,固定化时间为12 h,pH值为6.5时,固定化酶的活性最高.与游离酶相比,固定化酶有更好的温度和pH值稳定性.

关键词: 大孔树脂 , 木瓜蛋白酶 , 固定化 , 酶活

木瓜蛋白酶在介孔泡沫材料上的固定及性能研究

邹泽昌 , 韦奇 , 孙慧 , 纳薇 , 聂祚仁

材料导报

以氧化硅介孔泡沫材料(Siliceous mesocellular foam,MCF)为载体对木瓜蛋白酶进行了固定,并对固定化后材料的表征、固定化酶的性能以及酶的稳定性进行了研究.结果表明,木瓜蛋白酶在MCF上能获得较大的固定量(334mg/g MCF)和较高的酶活,固定化酶活力为游离酶的95.3%.固定化酶和游离酶的米氏常数Km值分别为6.99×10-3mol/L和6.71×10-3mol/L,并且相对于游离酶固定化酶的热稳定性和储藏稳定性都有明显改善.MCF是一种良好的木瓜蛋白酶固定载体.

关键词: 介孔泡沫材料 , 木瓜蛋白酶 , 酶固定化 , 热稳定性 , 储藏稳定性

高分子膜载体固定化木瓜蛋白酶吸附动力学

夏葵 , 曾虹燕 , 杨常桥 , 王橙 , 赵芳芳

高分子材料科学与工程

采用静态吸附法研究了高分子膜栽体尼龙6固定化木瓜蛋白酶的吸附特性,从热力学和动力学角度探讨了吸附机理.结果表明,等温吸附过程符合Freundlich模型,283 K、pH 6.0时,尼龙6对木瓜蛋白酶的饱和吸附量为1.692mg/g.动力学吸附过程符合准二级动力学方程,在283 K、293 K和303 K时,平衡吸附量的计算值(q_(e,cal))分别为1.778mg/g、1.780 mg/g和1.800 mg/g,与实验值接近.

关键词: 尼龙6 , 木瓜蛋白酶 , 动力学 , 热力学

金属螯合膜的制备及其对木瓜蛋白酶的分离纯化

何智妍 , 聂华丽 , 周毓婷 , 朱利民

膜科学与技术 doi:10.3969/j.issn.1007-8924.2009.05.016

制备了一种能有效分离纯化木瓜蛋白酶的金属螯合膜.该膜以包裹壳聚糖的尼龙膜为基质,通过环氧氯丙烷交联活化、亚氨基二乙酸偶联、金属镍离子螯合制备得到.研究了吸附时间、溶液的pH、溶液的离子强度等因素对吸附的影响,考察了吸附模型,并对其色谱性能和再生性进行探讨.结果表明,最佳吸附条件pH 10.0,反应时间60 min,离子强度0 mol/L,吸附量达67.2 mg/g,吸附行为满足Freundlieh等温吸附模型,其色谱过程中的洗脱剂为1.0 mol/L NaSCN的Tris-HCI(pH5.0)其纯化倍数可以达到19.1倍.吸附洗脱实验重复3次,吸附率仪降低8.7%,表明该模具有良好的稳定性,重复性和再生性,能有效用于木瓜蛋白酶的分离.

关键词: 金属螯合膜 , 吸附 , 木瓜蛋白酶 , Ni2+

氧化硅介孔泡沫材料固定木瓜蛋白酶的研究

邹泽昌 , 韦奇 , 纳薇 , 孙慧 , 聂祚仁

无机材料学报 doi:10.3724/SP.J.1077.2009.00702

以氧化硅介孔泡沫材料(Siliceous Mesocellular Foam,MCF)为载体对木瓜蛋白酶进行了固定,并对固定化酶的性能和影响因素以及酶的稳定性作了系统的研究.结果表明,木瓜蛋白酶在MCF上能获得较大的负载量(334mg/g MCF).固定化木瓜蛋白酶的最适反应温度较游离酶提高了10℃,最适pH向碱性方向偏移0.5个单位.固定化木瓜蛋白酶的米氏常数(Km)为6.99×10-3mol/L,在八批次操作后酶活保留65.1%.在4℃条件下放置60d后,固定化酶的剩余活性仍保持75%以上,而游离酶的活性只有初始活性的53.6%.与游离酶相比,固定化木瓜蛋白酶的pH稳定性、热稳定性、操作稳定性和储藏稳定性都有明显改善,有利于酶的重复使用和储藏.介孔泡沫材料是一种良好的木瓜蛋白酶固定载体.

关键词: 介孔泡沫材料 , 木瓜蛋白酶 , 酶固定化 , 稳定性

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