赵强
,
乐晓春
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2009.05.006
核酸适配体亲和色谱是将核酸适配体作为色谱固定相上的亲和配体的一种新型色谱技术.核酸适配体是一种可以特异性地识别目标物的寡聚核苷酸,与免疫抗体相比,核酸适配体在筛选制备、稳定性及应用等方面都显示出独特的优点.本文介绍了核酸适配体亲和色谱在小分子、蛋白质和细胞的分离和分析中的应用,对核酸适配体亲和色谱的研究现状和发展前景进行了综述.
关键词:
核酸适配体
,
亲和色谱
,
小分子物质
,
蛋白质
,
细胞
,
分离
,
检测
,
综述
刘兴奋
,
王亚腾
,
华笑笑
,
黄艳琴
,
冯晓苗
,
范曲立
,
黄维
分析化学
doi:10.11895/j.issn.0253-3820.160010
建立了基于主链含芴的阳离子型对芳撑乙炔衍生物(poly{[9,9-bis(6'-(N,N,N-diethylmethyl ammonium)hexyl)-2,7-fluorenyleneethynylene]-alt-co-[2,5-bis(3'-(N,N,N-diethylmethylammonium)-1'-oxapropyl)-1,4-phenylene]tetraiodide}, PFEP)和核酸适配体快速检测Pb2+的新方法。使用选择性更高的核酸适配体序列,有效降低了Hg2+对Pb2+检测的干扰,提高了检测的选择性和灵敏度。用于识别Pb2+的核酸探针(TBAA)末端用荧光素标记(5'-6-FAM-GGAAGGTGTGGAAGG-3')。当其与Pb2+发生特异性结合时,形成电荷密度高于单链DNA的G-四链体结构,与PFEP之间的静电作用增强,使能量供体(聚合物)与受体(荧光素)之间的距离拉近,发生更高效的荧光共振能量转移(Fluorescence resonance energy transfer, FRET)。其它金属离子由于不能和TBAA结合,且金属离子本身对聚合物和荧光素的荧光有一定程度的猝灭,因此其FRET信号远低于空白对照。本方法快速、灵敏,几分钟内即可完成检测,常见金属离子均不干扰检测。对湖水中Pb2+的检测限为1 nmol/L,远低于饮用水国家标准中对Pb2+浓度的限量标准。本方法为水中Pb2+的检测提供了一种简便、快速、高效的新方法。
关键词:
阳离子型共轭聚合物
,
核酸适配体
,
铅离子
,
荧光共振能量转移
肖鹏
,
李大雷
,
满燕
,
耿利娜
,
吕雪飞
,
邓玉林
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2012.07019
将核酸适配体作为胰蛋白酶固定化介质,制备了一种新型的微流控芯片酶反应器,并与高效液相色谱-串联质谱联用,搭建了在线分析平台；分别使用标准蛋白及混合蛋白样品对芯片的酶解效率及联用平台的分析能力进行了初步评价.结果表明,5 ng肌红蛋白经该平台分析后肽段覆盖率可达到37％；对500 ng混合蛋白进行3次平行分析,肽段覆盖率及相对标准偏差分别为44.3％、6.5％(牛血清白蛋白),65.0％、2.7％(肌红蛋白)和62.0％、5.6％(细胞色素c)；初步实验表明,该在线分析平台具有检测灵敏度高、重现性好、酶解效率高的特点,有望在蛋白质组学分析中发挥重要作用.
关键词:
高效液相色谱-串联质谱
,
胰蛋白酶
,
蛋白质
,
核酸适配体
,
芯片酶反应器
梅芳
,
赵新颖
,
屈锋
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2012.09033
以细胞色素c(Cyt c)为碱性蛋白质模型,建立了毛细管电泳评价Cyt c与3种不同链长的单链脱氧核糖核酸(ssDNA)库相互作用的评价方法,研究了离子强度对Cyt c与ssDNA库相互作用的影响.比较了Cyt c与含有20、40和60个随机碱基序列的3种不同链长的ssDNA库的作用及基于未涂层毛细管和涂层毛细管的毛细管区带电泳方法.因碱性蛋白质在未涂层毛细管管壁上存在吸附,因此利用未涂层毛细管区带电泳不能区别3种ssDNA库与其作用的差异.利用涂层毛细管电泳法,在压力辅助的反向电压下,根据游离ssDNA库的峰面积变化可比较3种ssDNA库与细胞色素c的相互作用差异.结果表明,含有20个随机寡核苷酸链长的ssDNA库与Cty c的作用最强.此外,NaC1浓度显著影响Cyt c与ssDNA60库的作用.在优化的实验条件下,0.02 mol/L NaC1有利于两者的相互作用.调节盐浓度可抑制非特异性静电作用,能提高碱性蛋白质适配体的单轮筛选效率.利用未涂层毛细管电泳分析复合物及游离ssDNA库的峰面积变化,可优化有利复合物形成的盐浓度.
关键词:
毛细管电泳
,
细胞色素c
,
单链DNA库
,
碱性蛋白质
,
核酸适配体
刘品多
,
屈锋
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2015.12015
核酸适配体（aptamer）是从人工合成的随机单链 DNA（ssDNA）或 RNA 文库中筛选得到的，能够高亲和力、高特异性地与靶标结合的 ssDNA或 RNA。核酸适配体的靶标范围广，可包括小分子、蛋白质、细胞、微生物等多种靶标。其中以细胞为靶标的适配体在生物感应、分子成像、医学诊断、药物传输和疾病治疗等领域有很大的应用潜能。但全细胞的核酸适配体筛选过程复杂，筛选难度大，筛选的适配体性能不佳是导致目前可用的适配体非常有限的主要原因。由于细胞表面蛋白质在提取纯化过程中分子结构和形态会发生改变，故以膜表面蛋白质为靶标筛选的适配体很难应用于识别整体细胞。以全细胞为靶标的核酸适配体筛选则不需要准确了解细胞表面的分子结构，筛选过程中可保持细胞的天然状态，以全细胞为靶标筛选出的核酸适配体有望直接用于全细胞识别。本文总结了2008～2015年全细胞的核酸适配体筛选的研究进展，介绍了靶细胞的分类、核酸库的设计、筛选条件和方法以及核酸适配体的亲和力表征方法等。并列出全细胞靶标的核酸适配体序列。
关键词:
核酸适配体
,
细胞
,
筛选
,
指数富集的配基系统进化技术
,
综述
陈尔凝
,
赵新颖
,
屈锋
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2015.12021
核酸适配体（ aptamer）是通过指数富集配体系统进化技术（ SELEX）筛选的能够以高亲和力和高特异性识别靶标分子或细胞的核糖核酸（ RNA）和单链脱氧核糖核酸（ ssDNA）。作为化学抗体，核酸适配体的制备和合成比抗体的成本更低。核酸适配体的靶标范围极其广泛，包括小分子、生物大分子、细菌和细胞等。针对细菌靶标筛选的适配体，目前主要应用于食品、医药和环境中的细菌检测。细菌的核酸适配体筛选可以通过离心法将菌体-适配体复合物与游离的适配体分离，并通过荧光成像、荧光光谱分析、流式细胞仪分选、DNA捕获元件、酶联适配体分析等方法表征适配体与靶标的相互作用。筛选出的适配体可结合生物、化学检测方法用于细菌检测。本文介绍了细菌适配体的筛选和表征方法以及基于适配体的检测方法的最新进展，分析了不同检测方法的利弊，并列出了2011～2015年筛选的细菌的核酸适配体。
关键词:
核酸适配体
,
细菌
,
筛选
,
指数富集配体系统进化技术
,
综述
王勇
,
赵新颖
,
石冬冬
,
杨歌
,
屈锋
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2015.05001
核酸适配体（aptamer）是通过指数富集配体系统进化（SELEX）技术筛选得到的核糖核酸（RNA）或单链脱氧核糖核酸（ ssDNA）。核酸适配体通过高亲和力特异性地识别小分子、蛋白质、细胞、微生物等多种靶标，在生物、医药、食品和环境检测等领域的应用日渐增多。但目前实际可用的核酸适配体有限，其筛选过程复杂，筛选难度大，制约了其应用。与生物大分子、细胞和微生物等靶标不同，小分子靶标与核酸分子的结合位点少、亲和力弱，且靶标通常需要固定在载体上。此外，小分子靶标结合核酸形成的复合物与核酸自身的大小、质量、电荷性质等方面差异较小，二者的分离难度大。故小分子靶标的核酸适配体筛选过程与大分子和细胞等复合靶标相比有明显差异，筛选难度更大。因此需要根据其自身结构特点和核酸适配体的应用目的选定靶标或核酸库的固定方法，优化靶标核酸复合物的分离方法。本文介绍了不同类型小分子（具有基团差异的单分子、含相同基团分子和手性分子等）靶标的选择及其核酸适配体的筛选方法，并对核酸库的设计、与靶标结合的核酸的分离方法和亲和作用表征方法进行了介绍，列出了自2008年以来报道的40余种小分子靶标的核酸适配体序列和复合物的平衡解离常数（Kd）。
关键词:
核酸适配体
,
小分子靶标
,
筛选
,
综述
杨歌
,
魏强
,
赵新颖
,
屈锋
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2015.12014
核酸适配体是通过指数富集系统配体进化（ SELEX）筛选获得的，与靶标具有高亲和力和特异性结合的单链DNA或 RNA。蛋白质是生命进程中的关键功能分子。近年来，以蛋白质为靶标的适配体筛选在蛋白质相关的基础及应用研究领域受到广泛关注。核酸适配体应用性能的优劣取决于其亲和力、特异性与稳定性。目前，适配体筛选方法的优化主要是提高筛选效率、提升适配体性能及降低筛选成本。适配体主要筛选步骤包括复合物分离、核酸库优化、次级库的富集、适配体序列分析以及亲和力表征等。迄今为止，以蛋白质-核酸复合物的分离为核心步骤的适配体筛选方法有20余种。本文归纳总结了2005年以来以蛋白质为靶标的适配体筛选技术，讨论了各方法的缺陷与局限。介绍了核酸库的设计优化方法、适配体的序列特征，以及常用的亲和力表征方法。
关键词:
核酸适配体
,
蛋白质
,
筛选
,
指数富集系统配体进化
,
综述
