王亮
,
刘翠平
,
贾丹
,
邹伟
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2006.03.014
采用氧化铝柱色谱法以95%乙醇作为洗脱剂分离纯化了肝源性磷脂酰胆碱(PC),并采用GF254硅胶板薄层色谱法以氯仿-甲醇-水(65∶25∶4,体积比)为展开剂测定了PC的纯度.结果表明以95%乙醇洗脱氧化铝色谱柱中的磷脂时,PC可完全与磷脂酰乙醇胺分离,其纯度和得率均高于80% .采用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT法)测定了不同浓度的PC对大鼠肝癌CBRH-7919 细胞增殖的影响,并与人白血病K562细胞做比较,发现肝源性PC对肝癌细胞的生长具有明显的抑制作用,且存在时间-剂量依赖关系.
关键词:
柱色谱
,
磷脂酰胆碱
,
猪肝
,
生物活性
,
肝癌细胞
孙嘉怡
,
任军
,
徐丽
,
贾凌云
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2010.00872
依据单胺氧化酶B(monoamine oxidase B, MAOB)的疏水特性,建立了一种从猪肝中分离纯化MAOB的新方法.用含有1% Triton X-100的膜蛋白裂解液制备粗酶,以饱和度为20%～50%的硫酸铵反抽提进行粗提,再利用自制的配基密度为75.7 μmol/mL的苯基疏水色谱及Sepharose Q High Performance离子交换色谱进一步分离纯化,得到纯化倍数为18.2、酶比活为135 U/mg的MAOB.十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析显示为相对分子质量约60 000的单一蛋白质带.采用高效液相色谱-电喷雾串联质谱对该酶进行鉴定,证实为MAOB.本研究所用分离纯化方法可以有效纯化MAOB, 为MAOB的深入研究提供技术支撑.
关键词:
苯基配基
,
疏水色谱
,
阴离子交换色谱
,
单胺氧化酶B
,
猪肝
张权青
,
张磊
,
高小迪
,
张维冰
,
张庆合
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2014.09019
发展了一种大体积循环进样方法，用于富集低丰度蛋白质。在优化的色谱分离条件下，通过增加蛋白质样品的上样体积提高低丰度蛋白质的绝对含量；进一步采用增加样品进样循环次数的方法提高蛋白质的富集效率。以猪肝提取蛋白质为样品，每次上样量500μL 的大体积11次循环进样。根据色谱峰的信号强弱，选择了在原始谱图中看不到色谱峰、有较少小峰和有较多小峰出现的时间段等有代表性的馏分进行研究。在中等极性的组分中，保留时间为11.38 min 和12.58 min 组分的富集效率分别提高了52倍和61倍，实验结果与理论富集效率相近。所发展的方法为生物蛋白质样品研究提供了一种新的富集制备及检测方法。
关键词:
大体积进样
,
循环
,
蛋白质
,
低丰度
,
猪肝
,
富集
