田嘉嘉
,
陈爽
,
李东辉
应用化学
doi:10.3969/j.issn.1000-0518.2006.12.002
建立了一种基于荧光各向异性原理均相测定蛋白酶及其抑制剂的方法. 具有如下特点:灵敏度高(可测到纳克级的蛋白酶);是一种均相检测方法,可对酶反应体系进行实时跟踪检测;作用底物是蛋白酶的天然底物-蛋白质;适用的pH值范围宽(pH 2.0～10.0),可用于酸性、中性和碱性介质中蛋白酶的测定;所用荧光标记物TMRITC的发射波长(581 nm)大于荧光素类(520 nm),有利于减少散射光的干扰,提高了荧光各向异性测量的稳定性. 还可应用于蛋白酶抑制剂的检测.
关键词:
荧光各向异性
,
罗丹明
,
蛋白酶
,
胰蛋白酶
,
胃蛋白酶
,
菠萝蛋白酶
,
蛋白酶抑制剂
田亚平
,
章克昌
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2005.03.013
采用乙醇分级沉淀、凝胶色谱纯化、阴离子交换色谱分离等步骤从灵芝深层发酵液中提取得到蛋白酶抑制剂GLPIA1与GLPIA2.其中GLPIA2仅在215 nm处有紫外吸收,经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定为单一条带,相对分子质量为15000.由其氨基酸组成分析谱图可看出,其酸性氨基酸含量较高,碱性氨基酸及芳香族氨基酸含量较低.GLPIA2抑制剂的底物特异性研究表明,它对天冬氨酸族的胃蛋白酶和酵母蛋白酶A有相对较强的抑制作用.
关键词:
凝胶色谱
,
阴离子交换色谱
,
纯化
,
蛋白酶抑制剂
,
灵芝
,
深层发酵
