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胰蛋白酶水解全酪蛋白反应过程中的色谱分析

齐崴 , 何明霞 , 何志敏 , 史德青

色谱 doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2002.01.001

将高效凝胶排阻色谱(HPSEC)技术与水解度(DH)概念相结合,对酪蛋白-胰蛋白酶水解体系的酶解反应过程进行色谱分析,得到定量表征复杂酶解反应进程和不同DH值时多样性酶解产物相对分子质量分布的二维图线;依据蛋白质结构信息,结合HPSEC实验谱图,对胰蛋白酶作用于酪蛋白时的酶解断裂位点进行剖析,初步推断反应历程,并得到理论酶解肽段的相对分子质量分布图及酶解物中活性多肽酪蛋白磷酸肽(CPPs)肽谱.

关键词: 酪蛋白 , 胰蛋白酶 , 酶促水解 , 水解度 , 高效凝胶排阻色谱 , 酪蛋白磷酸肽 , 肽谱

明胶-甘油-酪蛋白酸钠原位组装复合膜及分析

畅芬芬 , 李振方 , 张涛 , 韩燕梅 , 靳利娥

高分子材料科学与工程

首先将牛奶中提取的酪蛋白在温度为95℃、0.5 mol/L的NaOH溶液中水解3h,然后同甘油和明胶进行组装制膜.研究了甘油和明胶添加量对所制复合膜的拉伸强度和断裂伸长率以及阻水和阻氧性能的影响,并根据成膜组分的分子结构和作用特性,分析了成膜机理.结果表明,甘油和明胶的加入能显著提高复合膜的力学性能,改善膜的阻水和阻氧能力.当甘油、明胶和酪蛋白质量比为0.16∶0.80∶1.0时,膜的拉伸强度、水蒸气透过率和过氧化值分别为58.11MPa、4.44×10-6g/(m· h·Pa)和-7.52 meq/kg.明胶中氨基和羧基的存在同甘油的羟基和酪蛋白中的氨基和羧基之间的次级键作用是协同成膜的主要原因.

关键词: 酪蛋白 , 明胶 , 复合膜 , 成膜机理

聚偏氟乙烯膜亲水化改性及在酪蛋白分离中的应用

黎聪 , 高晶 , 洪丽瑾 , 李想

高分子材料科学与工程

采用化学改性的方法,在KOH/KMnO4体系中对聚偏氟乙烯(PVDF)膜表面进行化学处理,引入羟基等活性基团,并利用甘油水溶液增加膜表面的化学稳定性.分别改变试剂浓度、温度、反应时间等参数,确定最佳反应条件.实验结果表明,改性后的聚偏氟乙烯膜表面接触角减小,亲水性增强.将改性前后的膜分别应用于酪蛋白的分离实验,测定膜通量的衰减,发现改性后的PVDF膜表面的抗蛋白吸附能力有很大程度的提高.

关键词: 聚偏氟乙烯膜 , 亲水化改性 , 酪蛋白 , 抗污染

酪蛋白酶解反应复杂产物的色谱定量分析

于艳军 , 齐崴 , 何志敏

色谱 doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2005.02.015

根据酪蛋白酶解产物的高效凝胶排阻色谱(HPSEC)定性分析结果,选取不同截留相对分子质量的超滤膜对酶解产物进行截分,制得3种相对分子质量分布相对集中的区间组分;建立各组分峰面积与质量浓度之间的线性关系,由此定量计算不同反应时间的酶解产物中相应相对分子质量区间组分的质量浓度.研究表明,将膜分离方法与色谱分析相结合可实现对蛋白质、多肽等复杂体系相对精确的定量分析.

关键词: 酪蛋白 , 酶促水解 , 高效凝胶排阻色谱 , 复杂体系 , 膜分离 , 定量分析

酪蛋白多肽的制备和色谱分离方法

蔡焕新 , 殷宝茹 , 姚萍

色谱 doi:10.3724/SP.J.1123.2010.00637

为了得到低成本的多肽,本文利用胰蛋白酶对酪蛋白进行了充分的酶解.采用分析级反相高效液相色谱-电喷雾质谱联用技术(RP-HPLC/ESI-MS)分析了酶解产物各组分的组成,并通过改变流动相的梯度洗脱程序,优化了分析级色谱条件以充分分离相对含量较高的多肽组分;将优化的分析级色谱条件直接放大到制备级RP-HPLC中,在程序控制下通过紫外吸收信号结合ESI-MS信号共同引导实现了多肽的全自动化分离和收集.整个过程方便快捷,经过这样一个单一的分离步骤,得到了多个纯度较高的多肽.除此之外,本文还考察了流动相的酸碱性、柱上样量等因素对该体系制备级分离的影响,并对一次分离中分辨率不好的亲水性多肽混合物进行了二次分离,得到了多个新的多肽.本文建立的多肽制备方法为多肽和多肽材料的广泛应用提供了一种选择.

关键词: 高效液相色谱-电喷雾质谱法 , 制备级色谱 , 多肽 , 酪蛋白 , 蛋白酶 , 低成本

超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱检测食品中的牛奶过敏原酪蛋白

詹丽娜 , 陈沁 , 古淑青 , 邓晓军

色谱 doi:10.3724/SP.J.1123.2016.10034

基于超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱系统,建立了食品中牛奶过敏原酪蛋白的快速筛查和定量检测方法.样品经缓冲液提取后,采用5 kD超滤膜去除小分子杂质,得到蛋白质提取液.以数据依赖采集(data-dependent acquisition, DDA)方式获得全扫描质谱图,进行蛋白质定性确证,以平行反应监测(parallel reaction monitoring, PRM)技术对目标特征肽段进行定量分析.针对特征肽段,设计并合成了内标肽和内标物质,以降低基质效应和抵消处理过程中的损失.该方法应用于食品中的α-酪蛋白、β-酪蛋白和κ-酪蛋白的快速筛查和定量检测.结果表明,该方法在5~250 μg/L范围内线性关系良好,定量限为0.2~5.5 μg/kg,平均回收率在68.8%~104.4%之间,RSD<6%.该方法可用于果汁饮料、果酱、面包、早餐谷物中牛奶过敏原酪蛋白的快速筛查和定量分析.

关键词: 超高效液相色谱 , 四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱 , 酪蛋白 , 食品

磷钼杂多酸与蛋白质相互作用的共振散射光谱研究

梁爱惠 , 邹节明 , 蒋治良 , 王力生 , 覃爱苗

应用化学 doi:10.3969/j.issn.1000-0518.2002.08.014

磷钼杂多酸与蛋白质反应形成粒径为80 nm的复合纳米微粒,在470 nm处产生一个共振散射峰. 该纳米微粒和界面的形成是导致散射光信号增强的根本原因. 在选定条件下,建立了一个线性范围为6.0×10-8~5.0×10-5 g/mL及检出限为2.0×10-8~1.0×10-7 g/mL的测定人血清白蛋白和酪蛋白的共振散射光谱新方法. 该法具有灵敏度高、操作简便、准确度好、测定范围宽等特点,已用于合成样品和人血清样品分析,结果令人满意.

关键词: 磷钼杂多酸 , 人血清白蛋白 , 酪蛋白 , 共振散射光谱

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